HPLC法测定葛根总黄酮固体脂质纳米粒的载药量及包封率.docx

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were〔±〕%,〔±〕%,〔±〕%and〔±〕%,anddrugloadingwere〔±〕%,〔±〕%,〔±〕%and〔±〕%,’saconvenient,-SLNs.[Keywords]Puerariaflavonoids;Solidlipidnanoparticles;Drugloading;Entrapmentefficiency葛根为豆科植物野葛Puerarialobata〔Willd.〕Ohwi的枯燥根[1]。葛根总黄酮〔Puerariaflavonoids,PF〕是葛根的有效部位,具有活血化瘀之功,用于缺血性中风中经络恢复期瘀血痹阻脉络证。现代药理争论说明,PF具有抗血栓形成,抗细胞凋亡[2],抗胰腺损伤[3],抗偏头痛[4]及抗氧化应激[5-6]等作用。PF主要由葛根素〔puerarin〕、大豆苷元〔daidzein〕,大豆苷〔daidzin〕、3’-羟基葛根素〔3’-hydroxypuerarin〕、染料木素〔genistein〕、染料木苷〔genistin〕等组成[7]。但PF的水溶性和稳定性均较差,%[8],严峻制约其临床应用。为提高PF主要有效成分的生物利用度,有学者争论了固体分散体[9-10]、自微乳滴丸[11]及分散片[12]等,未见葛根总黄酮固体脂质纳米粒的相关争论报道。固体脂质纳米粒〔solidlipidnanoparticles,SLN〕由生理性脂质、外表活性剂和水组成,既具备聚合物纳米粒物理稳定性高、药物泄漏少等优点,又兼备脂质体、微乳等低毒性、规模化生产等优点,是一种极具进展前景的型给药载体系统,而受到各兴旺国家的广泛重视。SLN可增加与生物膜的黏附性,延长胃肠道的黏附时间和滞留时间,有效地提高药物生物利用度[13-14]。为提高PF溶解性、稳定性和生物利用度,本争论以PF为模型药物,承受高压均质技术[15-18]制备葛根总黄酮固体脂质纳米粒〔PF-SLN〕。载药量和包封率测定是制备SLN时处方筛选与质量评价的重要指标。为此,建立了HPLC同时测定PF-SLN中4种主要异黄酮类成分〔3’-羟基葛根素、葛根素、大豆苷及大豆苷元〕的方法,为PF-SLN的临床前争论奠定根底。材料与方法材料与试剂葛根素对照品购自中国食品药品检定研究院〔含测用,批号110752-202311〕,大豆苷元比照品购自上海同田生物〔批号 09020513,纯度≥99%〕,3’-羟基葛根素及大豆苷比照品由本试验室自制〔熔点、比旋度、UV、MS及NMR与文献全都,纯度均>95%〕;pritol888ATO,批号135683〕;吐温-80〔上海国药集团化学试剂,批号F20231214〕;甲醇为色谱纯,其他试剂为分析纯;PF自制[19-21],%,HPLC测得3’-羟基葛根素、葛根素、%、%、%%;PF-SLN由本试验室制备,批号分别为PFN130601,PFN130602,PFN130603。仪器与设备Waters高效液相色谱仪〔EmpowerPro色谱数据工作站,996二极管阵列检测器,600四元泵,717plus自动进样器,在线脱气机〕;高速分散机〔-TURRAX?,德国〕;高压均质机〔APV-2023,德国〕;高速离心机〔Sigma1-13〕;电子天平〔Sartourius,BP211D〕;超纯水器〔Millipore〕。 PF-SLN 的制备采用高压均质法〔high pressurehomogenizationtechnique,HPH〕制备PFSLN。称取处方量的脂质及PF,在〔85±2〕℃水浴加热溶化,混匀,为脂质相;另取处方量的吐温-80,加适量超纯水分散,置同温水浴中,为水相。在保温状态下,将水相倒入脂质相中,搅匀,先高速分散机4000r/min分散5min〔预试觉察:低于5min,则需增大高压均质次数,才能制得适宜粒径的混悬液;而超过5min,分散形成的泡沫过多,严峻影响后续操作〕,得微乳,趁热用高压均质机均质15次〔1500bar〕,即得PF-SLN。供试溶液制备〔1〕供试品溶液:周密吸取PF-,置5mL量瓶中,参加30%乙醇溶液稀释至刻度,微孔滤膜〔〕过滤,即得。〔2〕空白供试品溶液:按处方比例称取缺PF的脂质及外表活性剂,按PF-SLN的制备方法制得空白SLN,,置5mL量瓶中,参加30%乙醇溶液稀释至刻度,微孔滤膜〔〕过滤,即得。〔3〕比照品溶液:周密称取各比照品适量,分别用甲醇制成每1mL中含3’-、、、,即得。临用时稀释或制成混合比照品溶液。色谱条件Kromasil100-5C18〔×250mm,5μm〕色谱柱,预柱〔SecurityGuard,C18,×,Phenomenex〕;以甲醇-%枸橼酸溶液为流淌相,梯度洗脱[17];;柱温40℃;进样量10μL;检测波长250nm。系统适应性试验周密吸取“”项下的空白供试品溶液、供试品溶液及混合比照品溶液10μL,注入液相色谱仪,分析,即得。方法学考察[22]〔1〕检测限及定量限:将各比照品色谱峰测出的信号与空白样品测出的信号进展比较,分别以信噪比为3∶1及10∶1时注入仪器的量确定检测限和定量限。〔2〕线性关系考察:分别周密吸取上述比照品溶液适量,进样分析,分析结果以峰面积〔Y〕对比照品的进样质量〔X,ng〕进展回归。周密度试验:周密吸取各比照品溶液,注入液相色谱仪分析,重复6次。重复性试验:周密量取PF-SLN〔批号PFN130601〕,6份,按“”项下供试品溶液制备方法制备,进样分析。〔5〕稳定性试验:于0、1、2、4、8h,分别周密吸取供试品溶液〔批号PFN130601〕,注入色谱仪分析。〔6〕加样回收试验:周密量取含量的PF-SLNA〔批号PFN130601〕,6份,分别周密参加相当量的比照品溶液,挥干溶剂,同“”供试品溶液制备方法处理,测定。PF-SLN包封率及载药量测定〔1〕游离PF〔WF〕测定:周密吸取PF-,置离心管中,离心〔14000r/min〕30min,吸取上清液,注入色谱仪,分析,即得。〔2〕PF-SLN总药量〔WT〕测定:周密吸取PF-,置5mL量瓶中,参加30%乙醇溶液稀释至刻度,微孔滤膜〔〕过滤,分析,即得。按公式:包封率=〔WT-WF〕/WT×100%,载药量=〔WT-WF〕/WS×100%〔WS为载体材料及药物的总量〕,分别计算各成分的包封率及载药量。结果与分析系统适应性试验由分析结果可知,3’-羟基葛根素、葛根素、大豆苷和染料木苷吸取峰分别良好,脂质及外表活性剂对各成分的测定无干扰。见图1。方法学考察〔1〕检测限及定量限:3’-羟基葛根素、葛根素、~、~、~~。〔2〕线性关系:3’-羟基葛根素、葛根素、大豆苷和大豆苷元的回归方程分别为Y=+811837、Y=-429161、Y=-69893及Y=-43979,~、~3352ng、~~,。〔3〕周密度:所得各吸取峰峰面积的标准偏差〔RSD〕%、%、%%。说明仪器周密度良好。〔4〕重复性:%、%、%%。说明本法重复性良好。〔5〕稳定性:%、%、%%。说明供试品溶液在8h内稳定。〔6〕加样回收试验:见表1。试验结果说明,回收率符合规定。。3结论由分析结果可知,葛根总黄酮固体脂质纳米粒中4种异黄酮类成分的包封率及载药量存在肯定的差异,依次为大豆苷元>大豆苷>葛根素>3’-羟基葛根素。含量相对较低的3’-羟基葛根素、大豆苷元及大豆苷的包封率均超过80%,尤其是大豆苷元的包封率大于90%,而含量较高的葛根素的包封率并非最高。PF各成分的包封率及载药量与化合物的极性呈负相关关系,即成分的极性越小,其包封率及载药量越大,而与其含量大小无关。测定药物包封率时供试品溶液处理方法有多种。透析法操作简便、费用低廉,但较费时;凝胶柱色谱法操作繁琐、费时,用高浓度醇性洗脱剂分别游离药物时易破坏树脂;高速离心法是在离心力的作用下,使大分子和小分子分别。由于操作准确、简便、耗时短,样品不必稀释,不存在被包封药物泄漏等的问题,可有效分别游离药物与固体脂质纳米粒。因此,选用高速离心法制备样品测定包封率。争论说明,该方法操作简便快速、结果准确牢靠,可同时测定PF-SLN中不同成分包封率和载药量,为制剂临床前争论奠定了良好的根底。[参考文献]〔一部〕[S].北京:中国医药科技出版社,,蔡春春,邓小明,[J].中国中药杂志,2023,30〔11〕:855-,黎荣,梁韬,[J].中国试验方剂学杂志,2023,19〔8〕:231-,宁炼,石劲敏,[J].中国药与临床杂志,2023,32〔5〕:394-,[J].中国医药科学,2023,1〔1〕:65-[J].中国医药科学,2023,3〔2〕:40-42.[7]吴向阳,仰玲玲,仰榴青,-HPLC法同时测定野葛的根、茎和叶中葛根素、大豆苷和大豆苷元的含量[J].食品科学,2023,30〔14〕:248-,游学均,魏振平,[J].中国药学杂志,1997,32〔4〕:224-,孙其荣,姚康德,[J].中国药学杂志,2023,36〔11〕:745-,王旭彬,郭伟林,-水溶性壳聚糖固体分散体的制备[J].中国中药杂志,2023,35〔3〕:293-[D].长春:吉林大学,,易荆丽,周毅生,[J].中国试验方剂学杂志,2023,20〔1〕:107- 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