植物检疫危险性细菌幻灯片.ppt

第六章检疫性细菌病害
植物检疫性病原细菌的检验方法
梨火疫病 Fire Blight
玉米细菌性枯萎病 Stewart’s bacterial wilt of corn
椰子致死黄化病 Coconut Lethal Yellowing
柑橘黄龙病 Citrus Yellow shoot
复习思考题
第一节植物病原细菌检疫检验技术
直接检测:直观检验和生长检验
间接检测
活菌检测
免疫吸附分离法
噬菌体检验
非活菌检测
血清学检测
1、活菌检测
分离培养法:营养培养基、选择培养基或鉴别培养基分离纯化得到的细菌
浓缩接种及离体叶检测:提取液浓缩接种感病植物,观测发病情况。
例如:浙江大学等在1%灭菌水琼脂中加75×10-6的苯并咪唑,做平板,加感病植物叶片,针刺+摩擦接种,培养(光、温、湿度),短期获得症状。主要应用于水稻细菌性条斑病菌和小麦细菌性黑颖病菌的检测。

原理:结合血清学与平板分离技术,利用与抗原高度亲和性的抗体,来捕获目标细菌,样本中其他细菌均被冲洗掉,再将目标细菌转移或释放到培养基上生长。
方法:平皿免疫吸附评价测定法和免疫吸附稀释培养法
常用溶入丙酮的硝酸纤维素或指甲油作包被
洗涤液使用包被缓冲液
平皿免疫吸附评价测定法简略流程如下:

非活菌检测的方法很多,下表是检测病原细菌常用的一些方法,前9种血清学方法,均属非活菌检测。它们既能用于病原鉴定,又能直接用于病种或病株,甚至是无症感染组织的检测。

原理:
方法:酶联免疫吸附实验(ELISA)、免疫荧光抗体法
免疫荧光抗体法:将荧光染料(异硫氢酸荧光黄或罗丹明)与抗体以化学方法接合,再与抗体反应,形成有荧光标记的抗体—抗原复合物,在荧光显微镜下,可观察到黄绿色荧光。
1878年首先由burrill描述,在纽约发生,后由Erwin命名,是第一个被确定的植物细菌病害。主要分布于北美洲于西北欧,中欧、地中海、东南欧及大洋州和亚洲也有分布。大约40多个国家。
第二节检疫性病原原核生物
分布:
一、梨火疫病 Fire blight of pear