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前列腺癌基因诊断最新进展.doc前列腺癌基因诊断最新进展
前列腺癌是男性生殖系统常见的恶性肿瘤之一,近年来发病率有逐年上升趋势,目前对于前列腺癌柙仍缺乏有效治疗手段,转移及复发是前列醉腺癌死亡的重要原因之一。早期诊断、及供时治疗是提高前列腺癌疗效的重要措施,目前针对该疾病的实验室检查如前列腺特└异抗原(Prostatespecif苑icantigen,PSA)血清学检靥查、骨扫描、前列腺活检、免疫荧光实验颐及流式细胞仪等均无法检测出存在于血液、骨髓及淋巴结等处的前列腺癌微转移灶瀣。前列腺癌主要通过血道向远处转移,血堕液中微转移癌细胞的检测对于前列腺癌的位早期诊断、疗效观察及预后判断均具有重帻大意义。近年来,随着分子生物学技术的发展,特别是逆转录聚合酶链反应(R犄eversetranscrip-ti抡on-polymerasechain”reaction,RT-PCR),经摊PCR循环后,可以使单拷贝基因经过3炜5个循环后变成109,敏感度极高,可钆检测出每毫升血中含有的一个转移癌细胞俎,且极少出现假阳性,故特异性强,已成羿为检测微转移癌细胞的新手段,目前是人骸们研究的热点,本文就这方面的最新进展郾作一综述。
1RT-PCR技术的发展唪史
早在1985年,Mullis发明塔了PCR技术。1988年,该技术就已
补经成为检测血液中恶性肿瘤微小残余疾病畹的一种新工具〔1〕。RTPCR技术绽是在PCR基础上发展起来的基因诊断工洪具,进一步完善了PCR,它运用逆转录戊,可在细胞群中检测出组织特异细胞标志胆物,而不需要肿瘤细胞发生特异的突变或固基因重组。该技术的基本原理是由mRN墉A逆转录产生的cDNA链作为模板进行面PCR扩增。有关的报道最早见于199歃0年Vessella等人的研究〔2〕拢。作者运用RTPCR技术,在已发生囿转移的前列腺癌患者的淋巴结及骨髓中检弧测出PSA。外周血特异标志物的测定具锿有更大的意义。1992年Moreno等检测了12例DO3期前列腺癌患者和17例对照组外周血中的PSAmRNA嗔〔3〕,结果12例患者中4例为阳性,喾对照组均阴性。此项研究为了解和治疗前η列腺癌以及其他常见恶性肿瘤开辟了一条轲新路。
RT-PCR技术的低假阳性率楱(%)和高检测率(88%)表明该技术颖在临床有效诊断形式中具有不容忽视的地渗位。现有的RTPCR技术已能对前列熵癌进行分子分期,且测定的标志物水平随分子分期的提高而升高。GhossEi檎n等测定了伴有局部或远处转移的前列腺洲癌患者血中的PSAmRNA表达后发现传〔4〕,癌肿局限于原发器官的(T1-擢2)阳必为16%,T3-4或N+期阳性率为30%,有远处转移者为35%,礅表明血液中PSAmRNA的表达与Du莠kes分期有关,除了可以检测血液、淋雁巴结及骨髓等的微转移癌细胞外,还可以做为判断前列腺癌预后的一个重要指标。
2标志基因的选择
RT-PCR技术检测外周血肿瘤细胞,关键在于选择肿瘤细胞特异表达而血细胞不表达的基因即标志基因。作为前列腺癌传统的标志物PSA炊,已远远不能满足临床的需要。选择或配岽合其它的靶RNA将提高RT-PCR检测水平及结果的可靠性。
是一种血清蛋莛白酶,分子量为34KD,其合成仅限于ㄐ前列腺上皮,前列腺良恶性疾病均可见血铢清PSA水平升高。在男性,PSA为前搏列腺特异性,在女性,有报道正常的子宫恣内膜及某些确诊的乳腺和卵巢癌患者中也有PSA表达〔1〕
前列腺特异性膜抗耩原(Prostatespecific屯membraneantigen,PS频MA或PSM)是近年来克隆出的一种膜躜结合糖蛋白,分子量为100KD,是一唬种细胞膜表面标志物,和转铁蛋白有序列同源性〔5〕,其含量在抗激素治疗的患泣者中最高。Israeli等人研究发现恺〔6〕,用PTPCR技术检测外周血丙循环中前列腺细胞的PSMmRNA,有效性要高于PSAmRNA。Loric等人用PSM引物代替PSA引物提高了抨RT-PCR的敏感度〔7〕。作者采集了病人和对照组各20ml血,检测血液蚶中PSMmRNA,33个病人中28个为阳性,而11个前列腺癌患者均未检出镀PSAmRNA,表明RTPCR检测餍循环中前列腺细胞PSMmRNA表达比
腊PSAmRNA更敏感,而且在PSAm芰RNA表达阴性时仍然可以做为前列腺细裘胞的指标,理由是前列腺细胞的生长和增蜷生受雄激素调节,PSAmRNA和PSMmRNA的表达分别受雄激素上、下调笤节。抗雄激素治疗普遍应用于前列腺癌患岸者,因此当前列腺癌患者接受了抗雄激素^治疗后,PSAmRNA表达受到抑制,甍而PSMmRNA表达升高。正常前列腺闸上皮和恶性前列腺细胞均可产生PSA和PSM,但在高度未分化癌中的PSA的表达减弱或消失,而PSM