分子生物学实验理论与操作教程_百替生物.pdf

分子生物学实验理论与操作教程
分子生物学实验理论与操作教程
中国农科院研究生院
中国生化及分子生物学学会
植物病虫害生物学国家重点实验室
二零零四年七月
目录
前言---------------------------------------------------------
--I
第一部分核酸提取---------------------------------------------
-1
实验一:基因组 DNA 提取------------------------------------------
--1
实验二:总 RNA 提取----------------------------------------------
--3
第二部分亚克隆技术-------------------------------------------
--8
实验三:质粒 DNA 提取--------------------------------------------
--8
实验四: DNA 片段的酶切-------------------------------------------
-9
实验五:DNA 片段的酶修饰-脱磷------------------------------------
-12
实验六: DNA 片段的连接-------------------------------------------
-13
实验七: DNA 片段的回收------------------------------------------
-15
第三部分 PCR 技术----------------------------------------------
-18
实验八:PCR 产物的克隆技术---------------------------------------
-18
八. 1:T-载体构建-------------------------------------------
--19
八. 2:PCR 产物的 T-载体克隆----------------------------------
--20
:PCR 产物的平端克隆技术---------------------------------
-21 实验九: RT-PCR 技术------------------------------------------
-----21
实验十:定量 PCR ------------------------------------------------
-25
第四部分文库构建技术-----------------------------------------
-29
实验十一: mRNA 的提取及纯化-------------------------------------
-29
实验十二:cDNA 文库构建技术- cDNA 链的反转合成-------------------
-32 实验十三: 1,cDNA 文库构建技术- cDNA 链的连接、包装及转染-----
-----34
实验十三: 2,RACE 技术--------------------------------------------
-36
第五部分核酸杂交技术------------------------------------------
-40
vice@
实验十四: DNA 探针的标记-----------------------------------------
-40
实验十五: Southern 杂交技术--------------------------------------
-44
第六部分:基因及基因产物检测技术--------------------------------
--48
实验十六: DNA 的测序技术-----------------------------------------
-48
实验十七:基因表达 1,基因的体外快速翻译------------------------
-53
2,基因的诱导表达----------------------------
-54
实验十八:报告基因的应用----------------------------------------
--57
实验十九: Western 杂交技术---------------------------------------
-58
第七部分基因表达轮廓技术------