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血清TK1监测对胰腺癌诊断的临床意义
第九组:马健军,杨建敏,潘诗萌
目的
1
背景
2
原理
3
方法与结果
4
讨论
4
研究评价胰腺癌和胰腺炎患者血清胸苷激酶1(TK1)的表达
探讨联合检测TK1,CA19-9,CEA在胰腺癌与胰腺炎鉴别诊断方面的临床价值
目的
1
背景(胰腺癌现状)
2
胰腺癌是一种恶性程度很高,诊断和治疗都很困难的消化道恶性肿瘤,约90%为起源于腺管上皮的导管腺癌。其发病率和死亡率近年来明显上升。5年生存率<1%,是预后最差的恶性肿瘤之一。胰腺癌早期的确诊率不高,手术死亡率较高,而治愈率很低。本病发病率男性高于女性,~2:1,男性患者远较绝经前的妇女多见,绝经后妇女的发病率与男性相仿。胰腺癌的病因尚不十分清楚。其发生与吸烟、饮酒、高脂肪和高蛋白饮食、过量饮用咖啡、环境污染及遗传因素有关。胰腺癌临床表现取决于癌的部位、病程早晚、有无转移以及邻近器官累及的情况。其临床特点是整个病程短、病情发展快和迅速恶化。最多见的是上腹部饱胀不适、疼痛。主要临床这症状有腹痛,黄疸,消化道症状,消瘦,乏力,腹部包块,症状型糖尿病,血栓静脉炎精神症状,腹水和其他。
背景(研究现状)
2
胰腺癌是临床早期诊断和治疗最为困难的实体肿瘤之一。目前临床应用最广泛的胰腺癌标志物是血清糖类抗原19-9(CA19-9),但其阳性表达多见于进展期胰腺癌,不能提示早期胰腺肿瘤的恶性转化,而更多用于胰腺癌治疗效果的评判及治疗后肿瘤进展的监测。近期研究发现,许多胆、胰良性疾病也可导致血清 CA19-9水平升高,如胰腺炎、胆石症、胆汁淤积性胆囊炎等。癌胚抗原(CEA)主要在人体消化系统肿瘤中含量升高,目前多联合CEA与其他指标同时检测来提高胰腺癌诊断的准确性。细胞质胸苷激酶又称胸苷激酶1,简称TK1是一种新的细胞周期类细胞增殖标记物,研究表明其浓度伴随着肿瘤细胞的急剧增殖而升高。
什么是胸苷激酶1 (TK1)?
提出问题
胸苷激酶1(TK1) 是一细胞增殖性标志物,是DNA合成和损伤修复的关键酶之一
TK1, Mg++TdR TMP
TDP
TTP
DNA
dCTP
dGTP
dATP
Nucleus
(细胞核)
ATP ADP
Cytoplasma (细胞质)
原理
3
G1
S-phase
DNA合成期
G2
M
G1
正常细胞死亡在G1期或G0期
TK1的含量低
释放到血清中
的TK1含量很低。
细胞周期
大量肿瘤细胞在S/G2期死亡,
高浓度的TK1释放到外周血。
血清TK1水平高
细胞中的TK1含量
肿瘤细胞和正常增殖细胞中均可发现TK1,但是
肿瘤患者TK1高,健康人群TK1低。
原理
3
对43例胰腺癌患者和40例胰腺炎患者进行血清TK1水平检测,其中,胰腺癌患者40例,年龄36-79岁、;胰腺炎患者40例,年龄29-66岁、。同期选择健康体检者40例作为对照组,,中位年龄52岁,各组性别、年龄具有可比性。
试剂:TK1诊断试剂盒,包括:抗TK1抗体,TK1校准品,硝酸纤维素薄膜,辣根过氧化物酶标记亲和素,ECL试剂,生物素化二抗,抗体稀释液,封闭剂,抗体洗涤液

仪器:CIS-Ⅰ型化学发光数字成像分析仪,全自动化学发光免疫分析仪
方法
4
(1)标本收集
对胰腺癌患者组、胰腺炎患者组及正常对照组在空腹条件下分别采集静脉血2ml二份,一份检测血清TK1,另一份监测CA19-9和CEA浓度
(2) 检验步骤
①TK1:根据说明书配制抗体稀释液、洗液和封闭剂,
②将校准品1,2,3顺序点样至A1,A2,A3膜孔,待测样品按顺序依次点样至后续膜孔上室温晾干30min
③取出薄膜,稀释液振荡洗膜2次,每次5min,弃去洗液,按1:500稀释度配置一抗稀释液,25℃下振摇反应2h
④先用洗液快速漂洗2次后,振摇冲洗3次,每次5min,加入生物素化二抗后室温下振摇,本次反应时间为40min
⑤反应结束后洗涤,将链酶亲核素酶复合物按1:1500比例稀释后室温反应 1h,洗涤
⑥加入ECL发光剂,过膜浸湿,精确反应1min,将膜片吸干水份后放入塑料膜内
⑦将膜放入CIS-I 型化学发光成像分析系统内进行分析。
⑧CA19-9和CEA:直接化学发光法,在全自动化学发光免疫分析仪上测定
方法(步骤)
4
TK1参考范围: TK1≥2pmol/L  CA19-9 ≥ 37U/ml CEA ≥ 为阳性结果