[农业]高效液相色谱12.ppt

高效液相色谱技术与应用
(十二)HPLC方法论证与移植
方法谁研究的组成部分
准确度
精密度
线性
范围
检测限
定量限
专属性
普适性
强健性
样品、试剂、仪器的稳定性与系统的适用性标准
准确度(Accuracy)
准确度确定的三种方法:
与参比标准品比较
回收测定掺入空白基质中的被测物
被测物的标准品加入法
精密度(Precision)
国际协调会(ICH)提出的精密度分三种类型:
重复性
重复性为一种方法在相同的操作条件下短时间内的精密度。
其中一个方面为仪器精密度,通过依次重复进样分析同一均匀样品10以上,并平均面积或峰高值,以确定全部进样的相对标准(RSD),可测该精密度。
另一方面为分析内精密度,包括同一分析人员在同一条件下,对同一样品的多次测定
中间精密度
指在同一实验室内多次使用同一方法时,全部测定结果的一致性。包括不同日期、仪器或被测物的全分析,也包括多次配制的样品和标准品。
重现性
检验实验室间的精密度,往往在协作研究或方法移植实验中进行测定。
线性(Linearity)
方法的线性是衡量响应值与浓度的校正曲线近似为一条直线的程度。
大多数方法,尤其是定量分析主成分时,。
范围(Range)
方法的范围可定义为分析方法有足够的准确度、精密度和线性的最高和最低浓度。
浓度的范围应包括所测样品的期望值。在目标的50、75、100、125与150%进行研究是好策略。
检测限和定量限(Limit of Detection & Limit of Quantitation)
一个方法有两个重要特性:检测限(LOD)和定量限(LOQ)。
在方法论证期间测得的LOD和LOQ值受分离条件的影响:色谱柱、试剂,尤其是仪器设备与数据系统。
专属性(Specificity)
专属性为大多数分析方法中最重要指示,可定义为在其它样品物质存在的条件下可准确测定被测物浓度的能力。
测定方法专属性能用两种方法:
测试所有可能的干扰化合物以证明它们都能与检测物峰分离,并达到规定的分离度。
使用选择性检测器,特别是对共流出的化合物。
普适性(ruggedness)
方法的普适性被定义为方法在实际应用条件下运行时,其结果的重现性。
包括不同的分析人员、实验室、色谱柱、仪器、化学试剂与溶剂的来源等等。
强健性(Robustness)
强健性定义为方法被微小的、但有意的参数改变对结果影响的承受能力。
强健性最重要的方面是建立能预测分离参数变化对结果影响的方法
考察方法强健性的有效方法是用统计学实验设计,同时评估多个参数。