核酸分离和纯化.ppt

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核酸的分离和纯化
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找答案？
核酸分离纯化的原则是什么？为防止核酸降解需要注意什么？
核酸制备基本步骤？
如何鉴定核酸浓度和纯度？
核酸的保存方法有哪些？
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前言
核酸（nucleic acid）是以核苷酸为基本组成单位的生物信息大分子。是遗传信息的携带者，是基因表达的物质基础。
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核酸的分类：
DNA
核内染色体 DNA。
核外也有少量DNA，如线粒体DNA，叶绿体DNA。
质粒DNA。
RNA
存在于细胞质中，如mRNA, rRNA, tRNA等。
除上述DNA，RNA外，还有非细胞形式存在的病毒和噬菌体，其或只含DNA，或只含有RNA。
核酸的分类：
#2022
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主要内容
核酸分离与纯化的原则及要求
添加标题
核酸提取方法简介
添加标题
添加标题
核酸的鉴定和保存
核酸制备的基本步骤
添加标题
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核酸分离与纯化的一般原则
保持核酸分子一级结构的完整性，是核酸结构和功能研究的最基本要求。
排除其他分子的污染，保证核酸的纯度。
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化学因素？
生物因素？
物理因素？
核酸分离与纯化的要求
为保证核酸的完整性，
（防止降解），在实验中应注意：
尽量简化步骤，缩短提取时间，减少各种有害因素对核酸的破坏。
减少化学因素对核酸的降解，pH5-9。
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防止核酸的生物降解（细胞内或外的各种核酸酶水解）。
所用器械和一些试剂需高压灭菌，提取缓冲液中需加核酸酶抑制剂。操作温度为0~4℃。
DNA酶需要金属离子Mg2+、Ca2+的激活，因此使用金属离子螯合剂，如EDTA或柠檬酸盐等；阴离子表面活性剂SDS。
RNA酶分布广泛，极易污染样品，而且耐高温、耐酸碱、不易失活，生物降解是RNA提取过程中的主要危害因素。%DEPC（焦碳酸二乙酯 ）浸泡，器械180℃干烤8h。
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减少物理因素对核酸的降解，主要是机械剪切力，其次是高温。
机械剪切力包括强力高速的振荡、突然暴露于低渗液、样品反复冻融等。
高温，如长时间的煮沸。
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核酸纯度的要求：
非核酸生物大分子的污染降低到最低程度，如蛋白质、多糖和脂类分子；
排除其它核酸分子的污染，如制备RNA时，DNA分子是污染物；
去除对后续实验有影响的物质，如有机溶剂和过高浓度的金属离子。
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