核酸提取原理及方法.ppt

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年度工作总结汇报
赢润生物
曾 林
汇报时间：12月20日
Annual Work
Summary Report
#2022
前言
核酸是遗传信息的载体，是最重要的生物信息分子，是分子生物学研究的主要对象，因此，核酸的提取是分子生物学实验技术中最重要、最基本的操作 。


O1
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核酸简介
基因组DNA提取
质粒DNA提取
真核细胞总RNA提取
琼脂糖凝胶电泳
O2
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主要内容
核酸简介

核酸是由核苷酸或脱氧核苷酸通过3′，5′- 磷酸二酯键连接而成的一类生物大分子。包括核糖核酸(RNA)和脱氧核糖核酸(DNA)两类。
DNA主要储存遗传信息。
RNA主要传递遗传信息。
核酸简介
如何分离RNA？
如何分离DNA？

核酸简介——质粒DNA

质粒(Plasmid)是一种染色体外的稳定遗传因子，大小从1-200 kb不等，为双链、闭环的DNA分子，并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。
质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌等细胞中，它具有自主复制和转录能力，能在子代细胞中保持恒定的拷贝数，并表达所携带的遗传信息。

核酸简介
基因组DNA提取
质粒DNA提取
真核细胞总RNA提取
基因组DNA提取方法
基因组DNA提取的几种常用方法：
CTAB法
SDS法
其他方法

基因组DNA提取——CTAB法

CTAB（hexadecyltrimethylammonium bromide，十六烷基三甲基溴化铵），是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，并与核酸形成复合物。
该复合物在高盐溶液中（> mol/L NaCl）是可溶的，通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。
CTAB法原理（植物DNA提取经典方法）
基因组DNA提取——CTAB法
组份
Tris-HCl （pH ）
EDTA （pH ）
NaCl
CTAB
β-巯基乙醇
终浓度
100 mM
20 mM
M
2% (W/V)
%（V/V）使用前加入
Tris-HCl （pH ）提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏；
EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase活性；
NaCl 提供一个高盐环境，使DNP充分溶解，存在于液相中；
CTAB溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离；
β-巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，使酚容易去除。

CTAB提取缓冲液的经典配方