植物转基因技术.ppt

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提高融合效率和培养重复性是该技术研究的重点
杂种的成功培养是建立在原生质体的培养技术上的，选择和鉴定是获得细胞杂种的关键
原生质体融合技术主要有PEG融合和电融合
体细胞杂交在远缘育种与新物种、新资源创造中具有深远意义
植物体细胞杂交即原生质体融合，是获得胞质杂种的理想途径
第六章 小 结
原生质体定义
01
原生质体分离、纯化方法
02
原生质体融合方法及原理
03
原生质体融合的意义
04
植物原生质体培养的方法
05
植物体细胞杂交的概念和类型
06
体细胞杂种鉴定方法
07
体细胞杂种应用
08
思考题
植物基因转化技术
载体介导法, 如农杆菌介导转化法
DNA直接转移法
01
植物生物反应器
02
第八章 植物转基因技术
转基因研究技术的中心环节即为DNA重组技术，其最终目的是将DNA片段转入为一个生物体，从而使该生物体具有表现某种性状。
转基因通过获取基因、重组基因和表达基因等过程来实现。
转基因打破了物种的界限，使不同种的生物的遗传物质在分子水平上重新组合在一起，并且完全可以按照人的意志或目的，实现对生物体的改造。
植物基因转化技术
1
分离获得目的基因；
2
在体外进行DNA重组，将外源DNA连接到能自我复制又带有选择标记的载体上；
4
筛选出含有目的DNA的受体细胞克隆；
3
将重组DNA转移入受体细胞；
目的基因克隆的基本步骤
载体介导法, 如农杆菌介导转化法
根瘤
存在于能引起植物形成冠瘿瘤的土壤农杆菌中，诱导冠瘿瘤形成，又称肿瘤诱导质粒（tumor inducing plasmid）。
Ti质粒
T-DNA（transferred-DNA）
转移DNA，编码冠瘿碱的合成，能随机整合到植物的染色体上。长度一般为12-24kb，是Ti质粒最重要的部分。
冠瘿碱（opine）的作用
冠瘿碱是在冠瘿瘤内合成并分泌出来的，是农杆菌的碳源和氮源。大部分其他土壤微生物都不能利用冠瘿碱。
冠瘿碱代谢基因
分别编码代谢冠瘿碱的酶。维持农杆菌生长。
决定土壤农杆菌对植物的感染和T-DNA的转移， 进入和整合。
毒性基因（vir）
第一步:植物受伤
植物受伤后能分泌酚类化合物（如乙酰丁香酮、羟基乙酰丁香酮），诱导Ti质粒上的毒性基因表达。
② 农杆菌的感染和生存
第二步 感染植物
农杆菌吸附于植物的表面伤口部位（常在茎的基部）。