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一、严格区分无菌与有菌的界限
无菌物品一经接触有菌物品即为污染，不得再作为无菌物品使用。
手术者经无菌准备后，腰以下、肩以上、腋下和背部均为有菌区。手或无菌物品均不可接触这些部位，双手亦不可下垂至腰部以下。传递器械不可在背后进行。
器械台面和手术台面以下为有菌区（凡器械落至台面以下，即使未曾着地也不可再用；线自桌面垂下部分亦作为已污染处理）。
手套如有破损或接触有菌区应立即更换。
前臂、肘部被参观者接触时应套以无菌袖套。
手术人员需调换位置时，一人应退后一步，背靠背转身调换，身体的前面不可在别人背后擦过。
二、保持无菌布类干燥。铺无菌布单时，器械台与手术切应有4层以上。
三、保护切。切开皮肤及缝合之前应再消毒，皮肤切开后以纱布垫或特殊的塑料薄膜保护切。
四、保护腹腔。切开胃肠、胆囊、胆管等空腔脏器前，应先用纱垫遮盖保持周围组织，避免内容物溢出污染手术室。
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