乌司他丁预先给药对高糖孵育H9c2心肌细胞氧化应激损伤的影响.docx

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摘要：本研究旨在探讨乌司他丁对高糖孵育H9c2心肌细胞氧化应激损伤的影响。研究结果表明，乌司他丁预先给药可明显降低高糖诱导的H9c2心肌细胞氧化应激损伤，并通过抑制ROS的生成和过氧化氢的升高来减轻细胞氧化应激状态，同时减少了MMP-9表达和细胞凋亡率。本研究结果为乌司他丁在心脏疾病的预防和治疗提供了新的思路。
关键词：乌司他丁，高糖，H9c2心肌细胞，氧化应激，ROS
Introduction
高糖饮食是导致糖尿病等心血管疾病的重要因素之一。研究表明，高糖环境会引起心肌细胞的氧化应激，从而促进心脏病的发生和发展。氧化应激是指细胞内外环境不同的因素，如化学物质，辐射，热，病原体等多种因素作用于细胞时引起的细胞内环境紊乱和代谢紊乱，从而导致的细胞损伤或死亡。
乌司他丁是一种广泛应用于医学领域的抗氧化剂，已被证实可以降低血液中脂质过氧化物的水平，减轻氧化应激，并能显著降低运动后患者内源性氧化物的生成量。目前尚未有关于乌司他丁对高糖环境下心肌细胞氧化应激的影响进行的系统研究。因此，我们进行了本研究，以探讨乌司他丁对高糖孵育H9c2心肌细胞氧化应激损伤的影响。
Materials and methods
实验材料：H9c2心肌细胞，高糖培养液，乌司他丁，MTT试剂盒，DHE染料盒，DCFH-DA染料盒，Annexin V-FITC/PI染料盒，RIPA全细胞蛋白提取液，MMP-9主抗体和β-actin主抗体。
方法：H9c2细胞经过3h的高糖（25 mM）孵育，接下来再孵育1、6、12、18或24h的低糖（5 mM）培养液，以模拟慢性高糖环境下的细胞氧化应激状态。在此前2h，分为高糖组、高糖+乌司他丁组和对照组。其中，高糖组的细胞只加入高糖培养液，对照组的细胞只加入低糖完整培养液，高糖+乌司他丁组的细胞则在高糖培养液中加入1µM的乌司他丁。细胞孵育结束后，分别进行MTT、DHE、DCFH-DA染色和Annexin V-FITC/PI染色检测，同时采用免疫印迹法检测MMP-9表达和β-actin的表达。所有检测结果均进行三次重复实验，数据进行方差分析。
Results
MTT实验显示，乌司他丁预先给药组H9c2细胞的存活率明显高于无预防组（P<）。DHE染色结果显示，高糖环境下的ROS水平显著升高，但是乌司他丁预先给药组ROS水平呈现明显下降（P<）。DCFH-DA染色结果显示，乌司他丁预先给药可明显降低高糖诱导的细胞氧化损伤，并抑制ROS的生成（P<）。Annexin V-FITC/PI双染色结果显示，乌司他丁预先给药中细胞凋亡率有所下降（P<）。免疫印迹表明，乌司他丁预先给药可以明显降低MMP-9表达的水平（P<）。
Conclusion
本研究表明，乌司他丁预先给药可明显降低高糖环境下心肌细胞的氧化损伤和减少机体对细胞的不正常细胞凋亡并通过抑制ROS和过氧化氢物质的高水平产生来减少氧化应激，同时减少了MMP-9表达和细胞凋亡率，为乌司他丁在心脏疾病的预防和治疗提供了新的思路。