人巨细胞病毒UL83基因反义链转录和转录本结构研究.docx

该【人巨细胞病毒UL83基因反义链转录和转录本结构研究 】是由【niuww】上传分享，文档一共【2】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【人巨细胞病毒UL83基因反义链转录和转录本结构研究 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。人巨细胞病毒UL83基因反义链转录和转录本结构研究
人巨细胞病毒（HCMV）是一种广谱病毒，可导致各种疾病，包括婴儿的先天性感染、移植物宿主疾病和免疫抑制人群中的疾病。研究HCMV基因转录和转录本结构有助于我们更好地了解该病毒的生物学机制和致病性。
HCMV的基因组由约230 kbp的双链DNA组成，含有至少200个基因。其中，HCMV的UL83基因编码一个核酸酶，它在HCMV复制周期中的重要性已得到证明。该基因包含有内含子和外显子，而且大部分已有报道的真核生物基因一样，是由顺式序列组成的。
此次研究首先进行了基因的反义链转录，即将UL83基因上转录调控区反向克隆到质粒载体pBluescript II SK+上，形成pBS-83R质粒。利用该质粒进行转录实验，可以利用合成荧光素基因作为内部标准，用双标记酶底物法测定反义链转录的效率。结果表明，所构建的pBS-83R质粒可以成功地进行反义链转录，为后续研究HCMV UL83基因转录和调控奠定了基础。
接下来，我们对转录本结构进行了研究。将HCMV感染细胞的总RNA提取并逆转录，可得到UL83反义链转录本和上转录本。通过PCR扩增反义链转录本和上转录本的3'端，可以分别得到两种不同长度的片段，并用测序确定了它们的序列。结果表明，UL83基因的反义链转录本和上转录本都包含有内含子，而且它们的序列与互补链的外显子一致。
此外，我们还进一步研究了UL83基因的转录本的异构形式。我们又利用限制性内切酶和RT-PCR技术对UL83基因在感染细胞中的转录本进行分析。结果表明，UL83基因在感染细胞中转录出的异构形式具有多样性，主要存在于外显子和内含子边界的剪接位点的变异。这些异构形式可能对病毒的复制和感染产生不同的影响。
综上所述，在本研究中，我们成功构建了HCMV UL83基因的反义链转录质粒，并研究了UL83基因的转录本结构及其异构形式。这些结果为深入研究HCMV基因转录调控机制和解析HCMV致病性奠定基础，并为未来开发针对HCMV的新型治疗策略提供了参考。