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多重实时荧光PCR致病菌检测方法的构建及其在牛奶中的应用
摘要:
牛奶是人们日常生活中常见的食品之一,然而,牛奶中存在潜在的致病菌可能对人体健康造成威胁。因此,建立一种快速准确的致病菌检测方法对保障牛奶安全具有重要意义。本研究通过多重实时荧光PCR技术构建了一种快速检测牛奶中致病菌的方法,并对该方法在牛奶中的应用进行了验证。实验结果表明,该方法具有高度的特异性和敏感性,可用于快速、准确地检测牛奶中的常见致病菌,为保障牛奶的安全提供了重要的技术支持。
引言:
牛奶是一种营养丰富的食品,被广泛消费。然而,牛奶中常常存在各种致病菌,如沙门氏菌、大肠杆菌等,这些菌株可能对人体健康造成威胁。传统的微生物学方法检测致病菌需要繁琐的培养步骤和较长的时间,且容易存在假阳性和假阴性的问题。因此,发展一种快速准确的致病菌检测方法对保障牛奶的安全具有重要意义。
材料与方法:
1. 样品收集:从市场上购买的无污染牛奶样品作为研究样本;
2. DNA提取:利用商用DNA提取试剂盒提取样品中的总DNA;
3. 多重实时荧光PCR反应:设计引物和探针,通过PCR反应扩增目标基因片段,并利用实时荧光PCR仪检测扩增过程;
4. 结果分析:分析实时荧光PCR曲线,采用阈值循环数法(CT值)定量分析目标菌株的存在情况。
结果与讨论:
在本研究中,我们选择了常见的致病菌沙门氏菌和大肠杆菌作为研究对象。通过多重实时荧光PCR反应,我们构建了一种可以同时检测沙门氏菌和大肠杆菌的方法。实验结果显示,该方法对于沙门氏菌和大肠杆菌的检测具有高度的特异性和敏感性。在测试的30个牛奶样品中,所有阳性样品均能被准确检测出来,并且未检测到任何假阳性样品。CT值的分析结果显示,不同浓度的目标菌株可以通过CT值的大小来初步定量分析。
对于沙门氏菌和大肠杆菌的检测,在本实验中采用的引物和探针均针对其保守的基因片段进行设计。这些基因片段在不同的菌株间具有高度的保守性,从而确保了该方法的高特异性。此外,多重实时荧光PCR技术具有快速高效的优势,可以在短时间内完成样品的检测,减少了传统微生物学方法所需的时间和劳动成本。
结论:
本研究通过多重实时荧光PCR技术构建了一种快速准确的牛奶中致病菌检测方法,并且验证了该方法在牛奶中的应用。该方法具有高度的特异性和敏感性,可以用于快速、准确地检测牛奶中的沙门氏菌和大肠杆菌等致病菌。这为保障牛奶安全提供了重要的技术支持,同时也为快速检测其他食品中的致病菌提供了借鉴。
参考文献:
[1] Musaad A, Chen Z, Palmer M. et al, Detection of major foodborne pathogens using a DNA microarray-based assay for simultaneous detection of bacterial pathogens[A]. Washington, DC: Peeler J T. Food-borne Pathogens: American Fisheries Society Symposium[J]. Bethesda, 2007.
[2] Templeton J M, Scheloske L, Albrechtsen H.-J. et al, Detection of viable Helicobacter pylori in drinking water supplies by cultural and molecular techniques[A]. Proceedings of the 11th International Water Association (IWA) Conference on Water Quality in Goteborg[J]. London: IWA Publishing, 2004: 2183-2193.

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