实验植物DNA提取及检测.ppt

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植物基因组 DNA的提取
琼脂糖凝胶电泳检测
一 、实验目的
学习提取和纯化高等植物总DNA的方法，理解其原理。

脱氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)
与蛋白质结合在一起以核蛋白（DNP）的形式存在。在制备核酸时通常破坏细胞壁及细胞膜来使核蛋白释放出来。
植物总DNA包括细胞核DNA和细胞核外DNA,前者存在于细胞核内，后者存在于细胞质中有半自主性复制活性的细胞器内，例如线粒体DNA(mtDNA)和叶绿体DNA(ctDNA)。


二、实验原理
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细胞破碎 抽提去蛋白质 沉淀核酸
基本过程
机械方法： 超声波处理法、研磨法、匀浆法；
化学试剂法：用SDS处理细胞；
酶解法： 加入溶菌酶或蜗牛酶，破坏细胞壁。
细胞破碎
SDS法 SDS是有效的阴离子去垢剂, 细胞中DNA与蛋白质之间 常借静电引力或配位键结合, SDS能够破坏这种价键。
CTAB法 CTAB是一种阳离子去垢剂，它可以溶解膜与脂膜，使细胞中的DNA-蛋白质复合物释放出来，并使蛋白质变性，使DNA与蛋白质分离。
01
DNA提取
02
蛋白质 常用苯酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）或氯仿：异戊醇（24：1）抽提。
RNA 常选用RNase消化 ，或是用LiCl来消除大分子的RNA。
酚类物质 提取液中加少量巯基乙醇，选取幼嫩的材料。
DNA纯化（去杂质）
实验材料
1
植物叶片(去叶脉)
2
试剂
3
2×CTAB抽提液（CTAB、Tris-HCL、EDTA、Nacl）
4
TE 缓冲液(pH=)
5
氯仿：异戊醇(24:1)
6
巯基乙醇
7
异丙醇
8
70%乙醇
9
三、材料与试剂