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在生命科学研究中，蛋白质表达和纯化是非常关键的技术。小鼠CD147蛋白是一种跨膜蛋白，参与多种生物学过程，例如细胞黏附、信号转导、炎症反应、肿瘤转移等。本文首先介绍了小鼠CD147蛋白的结构和生物学功能，然后详细描述了在大肠杆菌中表达和纯化小鼠CD147蛋白的实验方法，最后分析了纯化后蛋白的生物活性。
小鼠CD147蛋白的结构和生物学功能
小鼠CD147又称为EMMPRIN（Extracellular Matrix Metalloproteinase Inducer），它是一种跨膜蛋白，分子量约为45 kDa，包含一个信号肽、一个外域和一个跨膜区及一个胞浆区。其中外域主要包含两个典型的免疫球蛋白（Ig）结构域，分别被命名为IgC1和IgC2。小鼠CD147在不同细胞类型中表达并有不同的购物形式，如单体、二聚体、多聚体等。
小鼠CD147在多种生物学过程中发挥重要作用。例如，CD147在肿瘤细胞中过度表达，并参与肿瘤细胞的转移、侵袭、转化。此外，小鼠CD147还参与了炎症反应、心血管疾病、神经退行性疾病等多个生理过程。因此，研究小鼠CD147的表达和纯化对于深入理解其生物学功能具有重要意义。
在大肠杆菌中表达小鼠CD147蛋白
在大肠杆菌中表达小鼠CD147蛋白需要先构建表达载体，将小鼠CD147基因克隆至表达载体中。在本实验中，采用pGEX-4T-1载体，该载体含有GST标签，可以方便地纯化表达产物。
首先，从小鼠肝脏组织中提取总RNA，采用RT-PCR方法扩增出小鼠CD147基因的cDNA。将cDNA插入pGEX-4T-1载体，构建成重组表达质粒pGEX-CD147，进行质粒测序，确保插入序列无误。
然后，将重组质粒转化到大肠杆菌BL21（DE3）中并生长到一定程度后，在1 mM IPTG诱导下表达GST-CD147重组蛋白。使用SDS-PAGE和Western blot技术鉴定表达产物，结果显示在表达后6小时时，在细菌中产生了明显的GST-CD147重组蛋白。
纯化小鼠CD147蛋白
在蛋白质纯化中，分子量筛选是一个关键的步骤。因为小鼠CD147基因蛋白分子量较小（约45 kDa），常规的蛋白质分离柱可能分离不出清晰的CD147蛋白带。因此，本实验采用超声波破碎法和Ni-NTA亲和层析法进行蛋白的纯化。
首先，使用超声波破碎法对表达小鼠CD147的大肠杆菌进行裂解，离心后取上清液，进行Ni-NTA亲和层析纯化。纯化过程中，使用50 mM Tris-HCl、300 mM NaCl、20 mM imidazole（pH ）洗涤，使用250 mM imidazole（pH ）洗脱目的蛋白。
将纯化后的蛋白质再次通过SDS-PAGE和Western blot技术进行鉴定，结果显示，从Ni-NTA亲和层析中成功纯化出了小鼠CD147蛋白，并检测到了明显的蛋白带。
小鼠CD147蛋白的生物活性分析
为了分析纯化后的小鼠CD147蛋白是否具有生物活性，我们采用了细胞黏附实验。将不同浓度的纯化小鼠CD147蛋白加入到培养的L929细胞中，探究其对细胞黏附的影响。结果显示， μg/mL小鼠CD147蛋白后，L929细胞的黏附率明显增加，提示小鼠CD147具有促进细胞黏附的生物活性。
结论
本实验成功构建了小鼠CD147表达载体并通过大肠杆菌表达了小鼠CD147蛋白，最终采用超声波破碎法和Ni-NTA亲和层析法进行了蛋白纯化，并采用细胞黏附实验验证了纯化后的蛋白具有生物活性。这项初步的研究为深入探究小鼠CD147的生物学功能提供了基础。