聚合酶链式反应PolymeraseChainReaction.ppt

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樊绮诗
202X
聚合酶链式反应Polymerase Chain Reaction
PCR技术
于1983年建立
能在体外复制已知序列的DNA片段
具有扩增效率高和特异性强的特点
为生命科学领域的研究开创了崭新时代
PCR原理
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耐热DNA聚合酶
引物
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添加反应混合液
及样本
变性
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退火
加入试管中
延伸
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继续延伸
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Taq
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Taq
Taq
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循环
PCR原理
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第二个循环
4个拷贝
第三个循环
8个拷贝
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第n个循环
2n个拷贝
PCR原理
PCR的反应体系
参与PCR反应的主要成份:
模板、引物、dNTP、Taq DNA聚合酶和
缓冲液等。
PCR的反应条件
反应温度（变性、退火、延伸）
添加标题
反应时间（变性、退火、延伸）
添加标题
循环次数（PCR效率及产物量）
添加标题
变性温度和时间
模板DNA充分变性是PCR顺利进行的前
提。在PCR扩增开始的第一次变性时， 应给
予足够的时间和温度，使基因组DNA充分变
性。一般在940C变性5～10 min。进入循环反
应后以94℃变性30～40s, 足以使模板DNA双
链变性。
退火温度和时间
PCR反应的特异性取决于退火时引物
模板的特异结合。退火温度一般低于引物
Tm50C左右，退火温度越高，产物的特异
性也越高；被扩增片段越大，退火所需时
间也相应延长。
延伸温度与时间
延伸温度设为72℃， 因为Taq DNA聚合
酶在72℃时具较高的酶促活性，有利于DNA
的复制。延伸时间视产物长度而异，时间过
长易导致非特异性扩增。