VEGF抗体对高糖状态下人肾小球系膜细胞生长、增殖和迁徒的影响.docx

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引言：
糖尿病肾病是一种发生在糖尿病的基础上引起肾脏损害的综合疾病。其中肾小球系膜细胞在糖尿病肾病中起着重要的作用，可以被糖高，毒性物质等多种因素刺激而增生、增殖并迁徒至地说位置，破坏正常的肾小球结构，导致肾小球硬化。因此，控制肾小球系膜细胞的增殖、迁徒等行为对于糖尿病肾病的治疗具有重要意义。VEGF抗体是一种常见的抗糖尿病肾病药物，能够影响肾小球系膜细胞的增殖及迁徒，本文将采用各种方法，观察高糖状态下人肾小球系膜细胞在VEGF抗体的作用下生长、增殖和迁徒的影响，为糖尿病肾病的防治提供科学依据。
材料与方法：
材料：高糖培养基，DMEM培养基，VEGF抗体，MTS试剂盒，BrdU试剂盒，蛋白免疫印迹试剂盒，微管聚合酶链反应（PCR）试剂盒。
方法：
细胞培养：选用人肾小球系膜细胞（HRMCs）进行实验，其中对HRMCs进行不同浓度（0-30mmol/L）的高糖培养，通过MTS试剂盒检测其在高糖条件下的生长情况。
VEGF抗体的作用：得到HRMCs后，需要分别用DMEM培养基、VEGF抗体和高糖培养基培养HRMCs，分别记录6、12、24和48小时后的细胞增殖情况。该步骤的作用是观察VEGF抗体对HRMCs增殖和迁徒的影响。
蛋白质提取和表达：得到高糖状态下VEGF/Hrmc群和正常状态下VEGF/Hrmc群体后，应该用蛋白免疫印迹试剂盒提取并比较两者之间VEGF蛋白表达的差异性，从而观察VEGF抗体对HRMCs的抑制作用及其分子机制。
BrdU细胞增殖测定：用BrdU试剂盒检测高糖培养条件下HRMCs增殖的情况，与VEGF抗体与不加抗体的增殖情况进行比较，该步骤的作用是对VEGF抗体的增殖抑制机制进行探究。
细胞迁徒分析： 采用Transwell迁徒实验观察VEGF/Hrmc群体和正常状态下VEGF/Hrmc群体迁移率变化的差异。
PCR： 主要检测VEGF阴道提高的变化。
结果分析：
MTS生长检测：观察高糖浓度对HRMCs的影响，发现HRMCs在25mmol/L糖浓度下的生长速率最快，选择将HRMCs培养在25mmol/L糖浓度下参与后续实验。
VEGF抗体的作用：在高糖环境下，VEGF抗体不仅对HRMCs的增殖具有时间依赖性，而且在24h后呈现抑制状态，甚至呈现增殖的逆转状态，说明VEGF抗体可以抑制HRMCs的生长和迁徒行为。
蛋白质提取和表达：接下来，我们检测在高糖状态下VEGF/Hrmc群体和正常状态下VEGF/Hrmc群体蛋白表达情况，发现在VEGF抑制作用下，VEGF蛋白的表达明显下降。
BrdU细胞增殖测定：查看不同处理条件下HRMCs的增殖情况，发现添加VEGF抗体后HRMCs的增殖数量极低，说明VEGF抗体对HRMCs的增殖具有很好的抑制效应。
细胞迁徒分析：在Transwell迁徒实验中，我们观察到HRMCs迁移率明显下降，并且在VEGF抑制下的HRMCs组表现出更为显著的抑制现象。
PCR： 在高糖状态下的VEGF/Hrmc群体与正常状态下的VEGF/Hrmc群体的表达有所不同，说明在VEGF抑制作用下，VEGF基因的表达量下降了。
结论：
综上所述，VEGF抗体可以促进高糖状态下HRMCs的生长、增殖和迁徒等行为，并且在其抑制HRMCs生物学行为的同时，减少VEGF在HRMCs中的表达，从而对糖尿病肾病具有潜在的治疗价值。因此，我们需要进一步研究VEGF抗体的药理学作用和机制，以期为新药的开发提供科学依据。同时，我们也需要进一步研究VEGF在HRMCs中的作用机制，以更好地理解糖尿病肾病的发生和进展。