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基因工程的基本操作步骤
获得目的基因
形成重组DNA分子
将重组DNA分子导入受体细胞
筛选含有目的基因的受体细胞
目的基因的表达
1
2
2
聚合酶链式反应(PCR)扩增
3
化学合成法
1
从基因文库中寻找
5
目的基因的核苷酸序列已知
4
目的基因的核苷酸序列未知
一、获得目的基因
基因组文库
部分基因文库
基因组DNA文库与cDNA文库的比较
基因组DNA文库
01
cDNA文库
02
基因文库中不是直接保管相应基因,而是保存受体菌,菌中含基因
PCR:是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。
原理:DNA双链复制
原料:模板DNA;DNA引物;四种脱氧核苷酸;热稳定DNA聚合酶(Taq酶);离子
02
01
03
利用PCR提取目的基因
PCR的基本原理
类似于DNA的体内复制。首先待扩增DNA模板加热变性解链,随之将反应混合物冷却至某一温度,这一温度可使引物与它的靶序列发生退火,再将温度升高使退火引物在DNA聚合酶作用下得以延伸。这种热变性-复性-延伸的过程就是一个PCR循环,PCR就是在合适条件下的这种循环的不断重复。
前提:
已知目的基因的脱氧核苷酸序列
方法:DNA受热变性解旋为单链、冷却后DNA引物与单链相应互补序列结合、DNA聚合酶作用下延伸合成互补链。
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