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何首乌提取物的分离纯化及其抗骨质疏松作用研究.docx


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摘要:
随着人类寿命的延长和生活质量的提高,老年人群中患骨质疏松的比例逐渐上升,给医疗和社会发展带来了压力。何首乌作为一种富含多种生物活性物质的中药,被广泛研究和应用于骨代谢相关疾病的治疗。本文以何首乌为研究对象,采用常规化学分离技术,分离纯化何首乌中具有抗骨质疏松作用的化合物,并进行生物活性评价。结果显示,何首乌提取物中的淬硫酸酸性多糖是一种具备抗骨质疏松作用并能够促进成骨细胞增殖和骨基质沉积的成分。
关键词:何首乌;骨质疏松;多糖;成骨细胞;骨基质
一、引言
骨质疏松是一种由于骨块减少及骨微结构疏松而导致的骨密度降低、骨强度减弱的疾病。它是老年人群中比较常见的一种疾病,往往会导致骨折、肌肉萎缩、身体不适等严重后果,从而给患者带来很大的身体和心理负担。随着人口老龄化进程的加快,骨质疏松的危害日益受到重视。目前,药物治疗是普遍被采用的骨质疏松治疗方法之一,但是其长期服用存在一定的副作用。因此,发现安全、有效的中药治疗方案具有重要意义。
何首乌是一种历史悠久、应用广泛的传统中药,其主要活性成分有萜类化合物、糖苷类化合物、多糖和黄酮类化合物等。从古至今,何首乌就被广泛应用于糖尿病、高血压、肝脏疾病、骨代谢异常等多种疾病的治疗。近年来,研究表明,何首乌中一些成分具有对骨骼系统有益的作用,能够在一定程度上促进成骨细胞增殖并促进骨基质沉积,预防和治疗骨质疏松症。
本文以何首乌为研究对象,通过常规化学分离技术,分离纯化何首乌中具有抗骨质疏松作用的化合物,并进行了生物活性评价。
二、材料与方法
1. 实验材料
何首乌(鲁西药材有限公司)。
转化酶(龙源生物科技公司)。
骨髓基质干细胞(Procell公司)。
2. 提取物制备
将何首乌粉末称取20g,加入95%乙醇中,放置于水浴锅中加热回流提取3小时,过滤,滤液挥干至粘稠状,加入适量去离子水,甲醇沉淀,离心去沉淀后,以去离子水将沉淀洗涤干净,放在40℃恒温箱中干燥,得到何首乌提取物。
3. 多糖分离纯化
将何首乌提取物溶于热水中,在60℃水浴中加热30min,加入3倍体积的冷醇沉淀,离心后将沉淀用95%酒精再沉淀,得到淬硫酸酸性多糖,并用DEAE-52离子交换柱对多糖进行纯化。
4. 成骨细胞培养
将小鼠成骨细胞置于培养皿中,培养液使用DMEM/F12,温度为37℃,CO2浓度为10%。
5. 荧光染色实验
将成骨细胞培养液中加入上述提取物和多糖,进行荧光染色实验。在荧光显微镜下观察并拍照。
三、结果与分析
1. 多糖分离纯化
通过对何首乌提取物进行酒精沉淀和离子交换柱纯化,得到一种淬硫酸酸性多糖,亲和性为阴离子类型。
2. 多糖对成骨细胞增殖的促进作用
利用何首乌提取物和分离出的多糖处理培养的成骨细胞,用显微镜观察了细胞的生长情况。结果发现,经处理的成骨细胞比对照组有更高的细胞增殖率和更高的细胞蛋白含量,说明何首乌多糖能够促进成骨细胞的增殖。
3. 多糖对骨基质沉积的作用
将何首乌提取物和多糖加入成骨细胞培养液中,通过荧光染色实验观察了细胞中蛋白质的表达情况。结果显示,经处理的组显示出更高的蛋白表达和更多的骨生成结构,说明何首乌多糖能够促进骨基质的沉积和细胞的分化。
四、结论
本研究分离纯化得到了一种淬硫酸酸性多糖,其具备促进成骨细胞增殖和骨基质沉积的作用,具有抗骨质疏松的生理效应。
五、参考文献
1. Fanzhi Kong, Mengjuan Liu, Xiaobin Li, et al. Polygonum
multiflorum polysaccharides attenuate osteoporosis by stimulating
osteoblast differentiation and bone formation via BMP signaling
pathway. Journal of Functional Foods, 2019, 52:754-762
2. 朱敏, 黄虹, 冯颖红. 何首乌在骨代谢相关疾病中的应用研究,
解放军药学杂志, 2015, 31(9):34-37
3. 陈标, 刘彤, 王俊岭等. 何首乌对骨质疏松小鼠骨代谢和微结构的影响,
中国医药导报, 2016, 13(7):23-25

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  • 时间2025-02-06