高中生物新人教版选择性必修3微生物的选择培养和计数教案.pdf

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第 2 课时 微生物的选择培养和计数

新课标 核心素养

：根据微生物的代谢特征配制选择
选择培养的原理。
培养基。

：设计实验分离土壤中的尿素分解
养某种微生物。
菌，并对实验结果进行分析与评价。
。

知识点(一)选择培养基及微生物的选择培养



1．实验室中微生物筛选的原理
人为提供有利于目的菌生长的条件(包括营养、温度和 pH 等)，同时抑制或阻止其他微
生物的生长。
2．选择培养基
在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长
的培养基。
3．微生物的选择培养(稀释涂布平板法)
(1)系列稀释(梯度稀释)操作：

(2)涂布平板操作：
①取菌液：取 mL 菌液滴加到培养基表面。
②涂布器灭菌：将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。再将涂布器放在火焰上灼烧，待酒
精燃尽，涂布器冷却后，再进行涂布。
③涂布过程：用涂布器将菌液圴匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂
布均匀。
④培养分离：待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入 30～37_℃的恒温培养 : .
箱中培养 1～2 d。在涂布有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的单菌落。

(1)选择培养基能使特定种类的微生物生长(√)
(2)微生物常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法(√)
(3)取 1 mL 稀释后的菌液，滴加到培养基表面进行涂布(×)
(4)将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽后，立即进行涂布(×)


1．(科学思维)筛选分解尿素的细菌的选择培养基的配方如表所示：
组分 含量
KH PO g
2 4
Na HPO g
2 4
MgSO ·7H O g
4 2
葡萄糖 g
尿素 g
琼脂 g
H O 定容至 1 000 mL
2

(1)在培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？
提示：碳源是葡萄糖，氮源是尿素。
(2)分离分解尿素的细菌的选择培养基是如何进行选择的？
提示：该选择培养基的配方中，尿素是培养基中的唯一氮源，因此，只有能够利用尿素
的微生物才能够生长。
(3)为什么只有能分解尿素的微生物才能在该培养基上生长？
提示：分解尿素的微生物能合成脲酶，而脲酶可将尿素分解成氨，从而为微生物提供氮
源。
2．(科学思维)设计对照实验：如何验证所用的选择培养基没有受到污染？
提示：将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产
生。

1．下列能分离出分解尿素的细菌的培养基是( )
A．KH PO 、Na HPO 、MgSO ·7H O、葡萄糖、尿素、琼脂、水
2 4 2 4 4 2 : .
B．KH PO 、Na HPO 、MgSO ·7H O、葡萄糖、琼脂、水
2 4 2 4 4 2
C．KH PO 、Na HPO 、MgSO ·7H O、尿素、琼脂、水
2 4 2 4 4 2
D．KH PO 、Na HPO 、MgSO ·7H O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水
2 4 2 4 4 2
解析：选 A 要想分离尿素分解菌，应把尿素作为培养基中的唯一氮源，而 B 项中无
氮源，C 项中无碳源，D 项中牛肉膏、蛋白胨都可作为氮源。
2．下列有关稀释涂布平板法操作的叙述，不正确的是( )
A．若稀释梯度以 10 倍为单位，当用移液管取 1 mL 原始菌液进行稀释时，其余试管
内的无菌水应为 9 mL
B．每次用灭菌后的移液管取菌液前，要先将菌液混匀
C．在涂布过程中，每次变换涂布的方向和位置时，应对涂布器进行灼烧灭菌
D．将菌液涂布在培养基表面时，为涂布均匀，应及时转动培养皿
解析：选 C 稀释梯度以 10 倍为单位时，如果溶液总量为 10 mL ，需用移液管将 1 mL
原始菌液移入盛 9 mL 无菌水的试管中，依次类推即可得到所需稀释倍数的菌液，A 正确。
每次用灭菌后的移液管取菌液前，要先将菌液混匀，B 正确。在涂布前，应将有少量酒精的
涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后冷却 8～10 s，用涂布器将菌液均匀涂布在培养基的表
面，涂布结束后，应对涂布器进行灼烧灭菌，以防污染环境和感染操作者，C 错误。涂布时，
可转动培养皿，使菌液分布均匀，D 正确。
[归纳提升]
两种接种方法的比较
项目 平板划线法 稀释涂布平板法
用途 一般用于菌种的纯化 一般用于筛选菌株
优点 可对混合菌进行分离 可以计数
操作复杂，若平板不干燥，则效果不好；若菌液浓度
缺点 不能计数
大，则长不出单菌落
培养
结果


知识点(二)微生物的数量测定
: .


1．微生物的数量测定
(1)原理：稀释涂布平板法除可以用于分离微生物外，也常用来统计样品中活菌的数目。
当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活
菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
(2)统计：通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数为 30～300、
适于计数的平板。在同一稀释度下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值。
(3)微生物的数量测定方法
①稀释涂布平板法。
②利用显微镜直接计数法。
2．实验设计(土壤中分解尿素的细菌的分离与计数)
(1)土壤取样
从富含有机质、酸碱度接近中性的潮湿土壤中取样。先铲去表层土，在距地表约 3～8 cm
的土壤层取样。
(2)样品的稀释
①稀释原因：样品的稀释度直接影响平板上生长的菌落数目。
②稀释标准：选用一定稀释范围的样品液进行培养，保证获得菌落数在30～300 之间，
便于计数。
(3)微生物的培养与观察
①培养：不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。
②观察：每隔 24_h 统计一次菌落数目，最后选取菌落数目稳定时的记录作为结果。

(1)利用稀释涂布平板法统计菌落数目时，统计的菌落数就是活菌的实际数(×)
(2)统计菌落数目时为保证结果准确，一般选择菌落数目最多的平板进行统计(×)
(3)利用稀释涂布平板法和平板划线法均可实现细菌的分离和计数(×)
(4)利用显微镜直接计数法统计的细菌数量就是活菌的数量(×)


1．(科学思维)甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。在对
应稀释倍数为 106的培养基中，得到以下两种统计结果。
(1)甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为 230，该同学的统计结果是否
真实可靠？为什么？ : .
提示：不真实。为增加实验的说服力与准确性，应设置重复实验，在同一稀释度下至少
涂布 3 个平板，统计结果后计算平均值。
(2)乙同学在该浓度下涂布了 3 个平板，统计的菌落数分别为 21、212、256，该同学将
21 舍去，然后取平均值。该同学对实验结果的处理是否合理？为什么？
提示：不合理。微生物计数时，如果实验中出现重复实验的结果差别很大的情况，应分