高中生物浙科版选修一知识点归纳.pdf

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高中生物浙科版选修一知识点归纳


选修一生物技术实践知识点总结

第一部分微生物的利用
一、微生物实验室培养的基本操作程序
1、器具的灭菌： P20-21，灭菌前，试管加棉花塞或塑料
盖、三角瓶用封口膜或 6 层纱布
封口……最后各种用品均需用牛皮纸或报纸包好，用高压
蒸汽灭菌法
（121C，1kg/cm2 压力）灭菌 15min。值得注意的是，实
验中所需的棉
花不能用脱脂棉，因脱脂棉易吸水，吸水后容易引起污染。
灭菌后，通
常将实验用具放入 60～80℃的烘箱中烘干，以除去灭菌
时的水分。在进
行实验操作前，将需要使用的用具从烘箱中取出，放到超
净台上。在超
净台工作之前，应先打开超净台的紫外灯和过滤风，工作
时关闭紫外灯。 : .
塞子制作的好坏是控制污染发生的关键。
2、培养基的配制：人们按照微生物对营养物质的不同需
求，配制出供其生长繁殖的营养
基质。
①培养基种类
尺度培养基类型
固体培养基
液体培养基
合成培养基
天然培养基
鉴别培养基
配制特点
加入琼脂
不加入琼脂
由已知成分配制而成
由天然身分派制而成
添加某种唆使剂或化学药剂
主要应用
菌种分离,鉴定,计数、保存
菌种的扩大培养 : .
菌种的鉴别
菌种的分离
按物理性
质分
按化学组
身分
按用途分
②微生物培养的培养基： LB 培养基。配制培养基时需考
虑营养物质的配比外，还需要
考虑微生物生长对 pH、氧气、渗透压等的要求。“细菌喜
荤，霉菌喜素”，
通常细菌培养基要用卵白胨和酵母提取物来配制，还要加
入一定量的氯化
钠，以维持一定的渗透压；霉菌培养基一般用无机物配制
或添加蔗糖的豆
芽汁即可。此外．细菌通常要求在中性偏碱的环境中生长，
霉菌要求在中性
偏酸的环境中生长。
选择培养基添加（或短少）某种化学身分 : .
3、培养基的灭菌：通常用高压蒸汽灭菌法灭菌。但假如
培养基中有葡萄糖，为防止葡萄
糖分解碳化，要用 500g/cm 压力（90C 以上）灭菌 30min。
有些不能加热灭
菌的化合物，如尿素（加热会分解）等，只能用 G6 玻璃
砂漏斗过滤，但玻
璃砂漏斗使用前也要在 121℃下用纸包好灭菌。玻璃砂漏
斗 6 种，即 G1～G6，
G6 孔径最小，细菌不能滤过。玻璃砂漏斗用后需用
1mol/L 的 HCl 浸泡，并
抽滤去酸，再用蒸馏水洗至洗出液呈中性，干燥后保存。
2
4、倒平板技术：在酒精灯火焰旁，将三角瓶中的培养基
倒在培养皿里。每倒入一个培养
皿后，将其置于水平位置上，并轻轻晃动，使培养基铺满
底部，待凝固后即
形成平面。
5、微生物的接种(包括培养和分离)：
细菌的接种或分离方法有两种：划线法和涂布法。划线法
就是用接种环蘸菌 : .
液后在含有固体培养基的培养皿平板上划线，在划线的过
程中菌液逐渐减
1
少，因此划线末了局部的细菌间间隔加大。涂布法需要先
将培养的菌液稀释，
-5-7 通常稀释 10—10 倍。取 稀释度不同的菌液，
加在培养皿的固体培
养基上，用玻璃刮刀涂布在培养基平面上，然后进行培养。
在适当的稀释度
下，可产生相互分开的菌落，通常以每个培养皿中有 20
个以内的单菌落最
为合适。划线法，方法简单；涂布法，单菌落更易分开，
但操作复杂些。
6、微生物的恒温培养： 37c 培养 12-24h（培养皿需倒置）
7、菌种的保存： ①临时保藏：接种到固体斜面培养基，
37℃培养 24h,菌落长成后置于
4℃冰箱保存。②长期保存：甘油冷冻管藏法
【注意点： : .

物污染外，另有什么目标？答：无菌技术还能有用避免操作者
自身被微生物感染。
，需要冷却到 50℃左右时，才能用来倒平
板。你用什么办法来估计培养基的温度？
答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温
度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。
？
答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
，为什么要将平板倒置？
答：平板冷凝后，皿盖上会固结水珠，将平板倒置，能够
防止皿盖上的水珠落入培养基，形成污染。

环？在划线操作结束时，仍旧需要灼烧接种环吗？为什么？
答：操作的第一步灼烧接种环是为了不接种环上可能存在
的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次
划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环
上的菌种间接起原于上次划线的末端，从而通过划线次数的增
加，使每次划线时菌种的数目逐渐削减，以便得到菌落。划线 : .
结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细
菌污染环境和感染操作者。
，为什么要等其冷却后再举行划线？
答：以免接种环温度太高，杀死菌种。
，为什么总是从上一
次划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比
线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的
数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到单菌落。】
二、尝试 1 大肠杆菌的培养和分离
（一）尝试目标

1、举行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基举行细菌培
养的操作。

2、举行大肠杆菌的分离，用固体培养基举行细菌的划
线培养。

3、说明大肠杆菌培养的条件和操作要求的原理。
（二）原理 : .
大肠杆菌是革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌，属于原核
生物。在肠道中一般对人无害，但也有一些菌株对人体是有害
的，可以侵袭肠黏膜并产生毒素。但是，任何大肠杆菌如果进
入人的泌尿系统，都会对人体产生危害。大肠杆菌是基因工程
技术中被广泛采用的工具。
2
本实验的内容是将大肠杆菌用 LB 液体培养基进行
扩大培养，在 LB 固体培养基上划线进行分离。分离后，
一个菌体便会形成一个菌落（菌落是鉴定菌种的重要
依据）。单菌落的分离是消除污染杂菌的通用方法，
也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一。（三）
设备及用品
（四）材料
（五）步骤 P22-23
三、实验 2 分离以尿素为氮源的微生物
（一）尝试目标

1、使用专一的培养基（以尿素为唯一氮源的选择培养
基）分离专一的细菌（含有脲
酶的细菌）。 : .

2、利用唆使剂颜色的变化检知酶（脲酶）所催化的反
应。
（二）原理
脲或称尿素，是卵白质降解的产品。在氮源只有尿素时，
有一些细菌含有脲酶，能通过降解尿素作为其生长的氮源，而
其他微生物却不能，所以这类细菌可从泥土平分离出来。
脲酶
（NH
2
）C=O+H
2
O2NH
3
+CO
2
本尝试的内容是从泥土平分离出能利用尿素的细菌，观察
菌落数，需要以 LB 全营养培养基为比较。
(三)鉴定分解尿素的细菌的方法 : .
以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。（酚红是
一种淡红色的酸碱指示剂，在酸性下呈黄色，在碱性下呈红色，
变色范围 —）培养皿中圆形红色区域愈大，表明这
种菌利用尿素的能力愈强。
（四）设备及用品
（五）材料
配置培养基时需要加琼脂糖(不含 N 元素)作凝固剂，配置
尝试组培养基时，需要添加酚红作为唆使剂，灭菌后冷却至
60℃，加入通过 G6 玻璃砂漏斗过滤的 10ml 尿素溶液，摇匀。
（六）步调