化学发光免疫技术省公开课一等奖全国示范课微课金奖PPT课件.pptx

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第一节 发光与化学发光剂
第二节 发光酶免疫测定（CLEIA）
（chemiluminescence enzyme immunoasssay）
第三节 化学发光免疫测定技术(CLIA)
（chemiluminescence immunoassay）
第四章 电化学发光免疫测定技术(ECLI)
(electrochemiluminescence immunoassay)
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化学发光免疫技术：集灵敏化学
发光分析和特异抗原抗体免疫测
定于一体检测技术。
概 念
特点：
特异性高、敏感性高、分离简便、
快速、试剂无毒、安全稳定、
可自动化。
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化学发光免疫技术类型
按发光剂不一样分为
（CLEIA）
chemiluminescence enzymeimmunoasssay
(CLIA)
chemiluminescence immunoassay
(ECLI)
electrochemiluminescence immunoassay
按分离方法不一样分


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第一节 发光与化学发光剂
一、发光 一个物质由电子激发态回复到基态时，
释放出能量表现为光发射。
:发光剂经短波长入射光照射后进入激
发态，当回复至基态时发出较长波长可见光。
:反应底物在荧光素酶催化下利用
ATP产能，生成激发态氧化荧光素，后者在回
复到基态时多出能量以光子形式放出。
:在常温下由化学反应产生光发射。
化学发光是一个多步骤过程。
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荧光素酶
ATP；O2；Mg2+
氧化萤火虫荧光素
萤火虫荧光素
生物发光
返回
光 + AMP+ O2 + CO2 +
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化学发光
机制：一些化合物能够利用化学反应产生能
量使其产物分子或反应中间态分子上升至电子
激发态。当此产物分子或中间态分子衰退至基
态时，以发射光子形式释放能量（即发光）。
二、化学发光剂
化学发光剂或发光底物：在化学发光反应中参
与能量转移并最终以发射光子形式释放能量
化合物。
发光剂分为荧光素、生物发光剂、化学发光剂
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①能参加化学发光反应；
②与抗原或抗体偶联后形成稳定结合物试剂；
③偶联后仍保留高量子效应和反应动力；
④应不改变或极少改变被标识物理化特征，
尤其是免疫活性。
化学发光剂应符合以下几个条件
返回
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是指经酶降解作用而发出光一类发光底物。
CLEIA中惯用酶有HRP和AP
HRP发光底物有鲁米诺、对-羟基苯乙酸
AP发光底物有AMPPD、4-MUP（荧光底物）
特点：可作标识物、也可作过氧化物酶底物
鲁米诺
H2O2 /OH —
HRP
+N2 + H2O +光
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对-羟基苯乙酸（HPA）
HPA在H2O2存在下被HRP氧化成氧化二聚体（荧光
物质），在350nm激发光作用下，发出450nm波长
荧光，可用荧光光度计测量。
HPA
H2O2
HRP
+荧
光
氧化二聚体
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AMPPD
AMPPD在碱性条件下，被AP酶解生成相当稳定
AMP-D阴离子，其有2～30min分解半衰期，发
出波长为470nm连续性光，在15min时其强度
到达高峰，15～60min内光强度保持相对稳定。
光
AP /OH —
HPO4 2—
AMPPD
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