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2、稀释水样 将1瓶90毫升和5管9毫升无菌水排列好，按10-1、10-2、10-3、10-4、10-5及10-6依次编号。在无菌操作条件下，用10毫升无菌移液管吸收10毫升水样置于第一瓶90毫升无菌水(内含玻璃珠)中，持移液管吹洗三次，用手摇10分钟将颗粒状样品打散。即为10-1浓度菌液。用l毫升无菌移液管吸收l毫升10-1浓度菌液于一管9毫升无菌水中，将移液管吹洗三次，摇匀即为10-2浓度菌液。一样方法，依次稀释到10-6。稀释过程如图 Sino-Dutch Demonstration Researcher and Training Centre for Water Treatment 第3页 样品稀释过程 Sino-Dutch Demonstration Researcher and Training Centre for Water Treatment 第4页 3、平板制作 取10套无菌培养皿编号，10-4、10-5、10-6各3个，另1个为空气对照。取1支1mL无菌移液管从浓度小10-6菌液开始，以10-6、10-5、10-(注：每次吸收前，用移液管在菌液中吹泡使菌液充分混勾)加热融化培养基，当培养基冷至45℃左右时，右手拿装有培养基锥形瓶，左手拿培养皿，以中指、无名指和小指托住皿底，拇指和食指夹住皿盖．靠近火焰，将皿盖掀开，倒入培养基后将培养皿平放在桌上，顺时针和反时针往返转动培养皿，使培养基和菌液充分混匀，冷凝后即成平板，倒置于30℃培养24～48h，然后观察结果。 取“对照”无菌培养皿，倒平板待凝固后，打开皿盖10min后盖上皿盖。倒置于30℃培养24～48h后观察结果。 倒平板 Sino-Dutch Demonstration Researcher and Training Centre for Water Treatment 第5页 (二)平板划线分离法 1、平板制作 将融化并冷至约50℃肉膏蛋白胨琼脂培养基倒入无菌培养皿内，使凝固成平板。 2、操作 用接种环挑取一环活性污泥(或土壤悬液等)，左手拿培养皿，中指、无名指和小指托住皿底，拇指和食指夹住皿盖．将培养皿稍倾斜，左手拇指和食指将皿盖掀半开，右手将接种环伸入培养皿内．在平板上轻轻划线(切勿划破培养基)，划线方式可取下列图中任何一个。划线完成盖好皿盖，倒置．30℃培养24～48h后观察结果。 Sino-Dutch Demonstration Researcher and Training Centre for Water Treatment 第6页 四、接种技术操作 因为试验目标、所研究微生物种类、所用培养基及容器不一样，所以，接种方法也有各种，如斜面接种技术 、液体培养基中菌种被接入液体培养基、液体接种 、穿刺接种、稀释平板涂布法等 本试验中只对稀释平板涂布法进行简单介绍 稀释平板涂布法与稀释平板法、平板划线法作用一样，都是把聚集在一起群体分散成能在培养基上长成单个菌落分离方法。此法接种量不宜太多，，培养时起初不能倒置，先正摆一段时间等水分蒸发后倒置。 Sino-Dutch Demonstration Researcher and Training Centre for Water Treatment 第7页 试验步骤以下： 1)稀释样品：方法与稀释平板法中稀释方法和步骤一样。
2)倒平板：将融化并冷至50℃左右培养基倒入无菌培养皿中，冷凝后即成平板。
3)用无菌移液管吸收一定量经适当稀释样品液于平板上，换上无菌玻璃刮铲在平板上旋转涂布均匀。
4)正摆在所需温度恒温箱内培养，假如培养时间较长，次日把培养倒置继续培养。
5)待长出菌落观察结果。 Sino-Dutch Demonstration Researcher and Training Centre for Water Treatment 第8页 五、思索题 用一根无菌移液管接种几个浓度水祥时，应从哪个浓度开始？为何? Sino-Dutch Demonstration Researcher and Training Centre for Water Treatment 第9页
