酶与其他生物催化剂省公开课一等奖全国示范课微课金奖PPT课件.pptx

该【酶与其他生物催化剂省公开课一等奖全国示范课微课金奖PPT课件 】是由【jimilu】上传分享，文档一共【103】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【酶与其他生物催化剂省公开课一等奖全国示范课微课金奖PPT课件 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。第三节
酶促反应动力学
The Kinetics of Enzymatic Reactions
第1页
概念
研究各种原因对酶促反应速率影响，并加以定量阐述。
影响原因包含有
酶浓度、底物浓度、pH、温度、抑制剂、激活剂等。
※ 研究一个原因影响时，其余各原因均恒定。
第2页
单底物、单产物反应；
酶促反应速率（velocity，V）普通在要求反应条件下，用单位时间内底物消耗量和产物生成量来表示；
反应速率取其初速率，即底物消耗量很小（普通在5﹪以内）时反应速率；
底物浓度远远大于酶浓度。
研究前提
第3页
一、采取酶促反应初速率来研究酶促反应动力学
（一）酶活性是指酶催化化学反应能力
衡量酶活性尺度是酶促反应速率大小。
酶促反应速率可用单位时间内底物降低许或产物生成量来表示。
因为底物消耗量不易测定，所以实际工作中经常是测定单位时间内产物生成量。
第4页
酶活性:
以国际单位（international unit, IU）表示。
在要求试验条件下（如温度、pH限定和足够底物浓度等），每分钟催化1mol底物转变成产物所需要酶量为1个国际单位（IU）。
第5页
催量（Katal）
1IU＝×10－9 Kat
1催量是指在特定条件下，每秒钟将1mol底物转化成产物所需酶量
比活性（specific activity）：比较酶纯度
比活性单位是每mg蛋白质所含酶国际单位数，
其单位是IU mg 蛋白1
第6页
（二）酶促反应初速率是反应刚才开始时测得反应速率
酶促反应初速率是指反应刚才开始，各种影响原因还未发挥作用时酶促反应速率，即反应时间进程曲线为直线部分时反应速率。
第7页
（二）有三类方法对底物和产物改变量进行检测
1．直接测定法是对底物或产物含量改变进行直接检测
有些酶促反应可在反应进行一定时间后，不用任何辅助反应便可直接测定反应液中底物或产物浓度。这类测定方法称为直接测定法（direct assay）。
还原型（Fe2+）细胞色素c在波长550nm处有显著吸收峰，而氧化型（Fe3+）则无；细胞色素c氧化酶对细胞色素c氧化反应，能够直接在波长550nm处检测一定时间内还原型细胞色素c降低过程 。
第8页
有些酶促反应底物和产物不能直接进行检测，必须增加一些辅助试剂来到达检测目标，这种方法称为间接测定法（indirect assay）
2．间接测定法利用非酶辅助反应对底物或产物改变进行间接检测
第9页
3．偶联测定法不直接包括原始反应底物或产物
许多酶促反应底物和产物即使不能直接检测，但能够与另外酶反应相偶联，偶联酶以第一个酶产物为底物，或以这类推，以最终酶反应产物能够直接检测为目标。这种经过偶联其它酶并对此酶促产物进行直接检测，间接地反应待测酶反应底物或产物改变量方法称为酶偶联测定法（enzyme coupled assay）
外加酶称为工具酶或辅助酶（auxiliary enzyme）
产物可直接检测酶称为指示酶（indicator enzyme）
丙氨酸转氨酶
丙氨酸 + -酮戊二酸  丙酮酸 + 谷氨酸
乳酸脱氢酶
丙酮酸 + NADH + H+  乳酸 + NAD+
（在340nm处有吸收峰） （在340nm处无吸收峰）
第10页