鲜茧-干茧生丝HPLC指纹图谱的构建研究.docx

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徐航　马明波　叶飞　杨亚娟　周文龙
Summary： 利用高效液相色谱，获取不同來源鲜茧和干茧生丝的高效液相色谱图，然后通过特征组分信息的提取，文章分别建立鲜茧/干茧生丝各自的HPLC（高效液相色谱法）指纹图谱，并利用指纹图谱对生丝样品进行相似度评价和系统聚类分析，来验证其对生丝的区分效果。结果表明：，，同类生丝的一致性良好。但鲜茧、干茧生丝的指纹谱图存在明显差别，说明两类生丝的特征组分不
同。根据两类生丝的特征差异进行系统聚类分析，可以完成对两类生丝的准确区分。经方法学验证，指纹图谱用于鲜茧、干茧生丝定性时具有良好的可靠性和可重复性。鲜茧/干茧生丝HPLC指纹图谱能反映出两类生丝的组分差异，可以作为鲜茧/干茧生丝的区分依据。
Key： 鲜茧生丝;干茧生丝;高效液相色谱;指纹图谱;相似度评价法;聚类分析
： 文献标志码：  A
： 10017003（2023）080021－07
引用页码： 081103 DOI： .1001-
在生丝的生产中，蚕茧不进行烘茧，直接在真空渗透后进行缫制称为鲜茧生丝;而经过烘茧、煮茧工序缫制的生丝，则被称为干茧生丝。中国的丝绸企业一般采用干茧生丝为主要生产原料，但因为鲜茧生丝工序较少，大幅降低了缫丝过程中的能源消耗，同时还产生了额外的副产品效益，因此在近年来得到了快速推广［1］。但蚕丝由多种蛋白质构成，还含有酰胺类、多酚类、酯类等微量组分。当采用不同的缫丝工艺时，构成生丝的蛋白质会发生物理或化学变性［2］，微量组分也会不同程度地挥发、降解及溶失。这些差别使鲜茧/干茧生丝的抱合、拉伸、洁净等性能出现了明显差异［3］，不利于生丝市场交易的规范和生丝产品质量的控制。因此，需要对鲜茧/干茧生丝的差异进行研究，以更好区分两类生丝产品。
目前，已存在一些鲜茧/干茧生丝的鉴别方法。李冰等［4］通过测定并比较生丝束在十二烷基苯磺酸钠水溶液中的沉降速度，来对鲜茧/干茧生丝进行鉴别。乔铁军等［5］对两类生丝进行抱合力项目检测，通过干茧生丝抱合力显著优于
鲜茧生丝对两者进行了区分。盖等［6］利用扫描电镜观察纤维表面，通过微观形貌差异来区分出鲜茧生丝和干茧生丝。此外，目前还有基于红外光谱、X射线衍射［3］、高效液相色谱［7］等检
测技术对鲜茧/干茧生丝进行鉴别的方法。但由于生丝的内部组成成分复杂，其中的附生物还会受到地域、季节、蚕种等因素的影响［8］。因此，对于市场上来源复杂的生丝产品，目前的鉴别方法难以达到稳定、精确的鉴别效果。
指纹图谱法在综合反映样品组分差异的同时还能系统地展现出样品特征，能为不同种类样品的鉴别提供可靠依据，已被广泛应用于食品的品种判别［9］、中医药材［10］的鉴定等领域中。本文在充分考虑鲜茧、干茧生丝来源的复杂性，获取具有代表性的、不同来源的鲜茧和干茧生丝的高效液相色谱图。在高效液相色谱的基础上提取共性组分色谱数据，构建了鲜茧和干茧生丝样品的共有模式指纹图谱，并通过相似度评价和聚类分析，对不同种类的生丝样品进行归类和鉴别。以期在面对来源复杂的生丝产品时，提高鲜茧/干茧生丝区分结果的准确性，为生丝市场的交易规范和织绸企业的原料选购提供依据。
1 实 验
材料与仪器
材 料
去离子水（实验室自备），分析纯甲醇、醋酸（杭州高晶精细化工有限公司）。实验所用蚕茧样品于2022年5月—2022年11月采购自浙江、江苏、广西等传统蚕茧主产区的农户和庄口，均为活蛹蚕茧。选择12个不同批次的蚕茧
制备为鲜茧生丝样品（编号为S1～S12）和12个不同批次的蚕茧制备为干茧生丝样品（编号为R1～R12），各样品的产地、蚕种及茧期信息如表1所示。
仪 器
AR124CN电子分析天平（美国奥豪斯仪器上海有限公司），GZX-9140 MBE数显鼓风干燥箱（上海博讯实业有限公司医疗设备厂），HH-12468数显恒温水浴箱（常州鸿泽实验科技有限公司），R201D旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂），JP-100S型超声波清洗机（深圳洁盟超声清洗机有限公司），DHG-9055A鼓风干燥箱（上海瑞稳仪器设备厂），LC-100高效液相色谱仪（上海伍丰色谱仪器有限公司）。
方 法
缫丝工艺
干茧缫丝工艺：经过剥选后的蚕茧放入烘箱，采用热风循环干燥法进行烘茧。头冲温度110 ℃，烘茧时间2 h，二冲温度设定为80 ℃，烘茧时间4 h。将烘干后的蚕茧完全浸入60 ℃的水中，浸渍处理3 min。浸渍完成后进行真空渗透， MPa，在40 ℃的温水中渗透10 min。待蚕茧渗透充分后取出，放入煮茧汤锅，设置100 ℃的水温进行煮茧2 min。加冷水调整水温至80 ℃，压煮、浮煮3 min，并进行索绪。煮茧完成后调整汤温至40 ℃。理绪后通过手摇式缫丝机进行缫丝，将缫制的生丝置于室内通风场所自然干燥24 h至完全干燥。
鲜茧缫丝工艺：将经过剥选的蚕茧完全浸入60 ℃的水中，浸渍处理3 min，然后进行真空渗透， MPa，渗透水温40 ℃，渗透时间10