重组猪生长激素PGH的高效表达、纯化及活性鉴定.docx

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摘要
猪生长激素PGH是一种重要的蛋白质激素，能够促进猪的生长和发育，具有广泛的应用价值。本研究以大肠杆菌为宿主，构建了一个高效表达PGH的载体，并通过酸销方法和柱层析技术对PGH进行了纯化。进一步对其活性进行了鉴定，结果表明，纯化得到的PGH能够有效地刺激小鼠生长和增重。
关键词：猪生长激素PGH；大肠杆菌；表达；纯化；活性鉴定
引言
猪是我国重要的畜牧业生产动物，在保证其养殖密度和饲料条件的前提下，提高猪的生长速度和重量是本行业的首要任务。猪生长激素PGH是一种能够促进猪的生长和发育的重要蛋白质激素。然而，高效表达和纯化PGH成为了该激素应用的一大难点。因此，本研究旨在建立一种高效表达、纯化和活性鉴定PGH的方法。
材料与方法
1. 载体构建
选取pET-28a载体，将PGH基因插入载体中，得到重组表达载体pET-28a-PGH。
2. 转化宿主菌
将pET28a-PGH转化至大肠杆菌BL21 (DE3)中，得到过表达菌株BL21 (DE3)/pET28a-PGH。
3. 表达条件优化
优化温度、诱导剂浓度和时间，以提高PGH表达量。
4. 酸销纯化
采用酸销技术，从菌体中提取PGH，得到PGH含量较高的提取物。
5. 柱层析纯化
将提取物用硫酸铵分级沉淀，再用Ni2+ 亲和柱层析纯化PGH。
6. 活性鉴定
采用小鼠体内刺激实验，比较纯化的PGH和天然PGH的生长刺激作用。
结果
1. PGH基因成功插入pET-28a载体，构建了重组表达载体。
2. BL21 (DE3)/pET28a-PGH菌株在优化的表达条件下能够高效表达PGH。
3. 酸销提取PGH后，其总含量较高，通过Ni2+ 亲和柱进一步纯化，得到了高纯度的PGH。
4. 采用小鼠实验比较了纯化的PGH与天然PGH的生长刺激作用，结果表明纯化的PGH与天然PGH有相似的生长刺激作用。
讨论
本实验成功地建立了一种高效表达、纯化和活性鉴定PGH的方法。BL21 (DE3)/pET28a-PGH菌株在优化的表达条件下能够高效表达PGH，酸销、Ni2+ 亲和柱层析方法的结合纯化了PGH，并通过小鼠实验确定了其生长刺激作用。这一方法为PGH的应用提供了有效的手段，为畜牧业的快速发展提供了有力的支持。
结论
本研究成功地建立了一种高效表达、纯化和活性鉴定PGH的方法，未来可将其用于猪的生长和发育方面的研究和生产中。
参考文献
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