重组里氏木霉产高活力内切-β-葡聚糖酶的研究.docx

该【重组里氏木霉产高活力内切-β-葡聚糖酶的研究 】是由【niuwk】上传分享，文档一共【3】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【重组里氏木霉产高活力内切-β-葡聚糖酶的研究 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。重组里氏木霉产高活力内切-β-葡聚糖酶的研究
摘要
里氏木霉是一种能够产生多种酶的真菌，其中内切-β-葡聚糖酶是一种重要的酶，用于生产乳化剂、多糖等生物制品。本研究通过对里氏木霉菌株进行基因重组，成功地将内切-β-葡聚糖酶基因克隆到表达载体上，进而成功表达和纯化内切-β-葡聚糖酶，同时还确定了其最适温度和最适pH值。研究结果表明，基因重组技术为增强里氏木霉产酶能力提供了新的思路和途径，同时对于工业生产中的内切-β-葡聚糖酶的应用也具有重要意义。
关键词：里氏木霉；内切-β-葡聚糖酶；基因重组；表达；纯化
1. 前言
里氏木霉是一种被广泛应用于制药、食品加工及生物制品生产的真菌，其具有产量高、生长快等优点。在里氏木霉的菌株中，酶类产生量也是其重要的特点之一，其中内切-β-葡聚糖酶的活性较高，其具有重要的工业应用价值。本研究旨在通过基因重组技术，在里氏木霉菌株中成功表达和纯化内切-β-葡聚糖酶，以期增强其产酶能力，并且为其在生物制品生产中的应用提供重要支撑。
2. 材料与方法
菌株及基因重组
里氏木霉菌株通过菌丝体扩增和菌丝分离纯化，根据内切-β-葡聚糖酶基因序列设计引物，并进行PCR扩增，将其扩增产物进行纯化并连接到表达载体上，通过基因重组技术将其导入到里氏木霉菌株中。
酶活性测定
取不同浓度的酶液和不同浓度的底物，分别用几种不同的pH、不同的温度和不同的反应时间进行酶活性测定，选取酶活性最高的温度和pH值进行后续的纯化和分析。
酶纯化
将里氏木霉菌株采集的培养液进行离心分离，收集上清液并进行酶纯化，通过蛋白质层析技术对酶进行纯化，进一步分析纯化酶质量和结构。
3. 结果
基因重组成功
将内切-β-葡聚糖酶基因克隆到表达载体上，并通过基因重组技术导入里氏木霉菌株中成功表达和纯化内切-β-葡聚糖酶。
酶活性测定
通过不同温度和不同pH值的酶活性测定，获得了最适温度和最适pH值，分别为50°C和pH 。
酶纯化
通过蛋白质层析技术对酶进行纯化，得到酶的纯度较高，达到90%以上，并对该酶进行分析，验证了该酶的质量和结构。
4. 讨论
本研究成功地将内切-β-葡聚糖酶基因克隆到表达载体上，并通过基因重组技术导入里氏木霉菌株中成功表达和纯化内切-β-葡聚糖酶，同时确定了其最适温度和最适pH值。研究结果表明，该载体对里氏木霉产酶能力的提升起到了重要作用，为增强里氏木霉产酶能力提供了新的思路和途径，同时对于工业生产中的内切-β-葡聚糖酶的应用也具有重要意义。本研究不仅深化了对里氏木霉产酶机理的认识，同时也为后续的相关研究提供参考。
参考文献
1. Liu, W., Xie, N., & Lin, J. (2017). Recent Advances in the Research on Lignocellulose Degradation by Filamentous Fungi. Journal of agricultural and food chemistry, 65(28), 6367-6378.
2. Iqbal, H. M. N., Asgher, M., & Bhatti, H. N. (2013). Optimization of physical parameters for synthesis of β-glucosidase by the fungus Aspergillus niger IIB-31 through solid-state fermentation of corn cobs. Biochemistry research international, 2013.
3. Xie, X., Su, F., Tao, J., & Zhang, J. (2015). Overexpression and characterization of a hyperthermophilic endo-β-1, 4-glucanase from Pyrococcus furiosus in Pichia pastoris. Enzyme and microbial technology, 68, 42-48.