鸡粪中多重耐药细菌的分离鉴定及介导抗性基因水平转移元件的检测.docx

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引言
鸡粪被广泛应用于农业生产中，使得农业废弃物处理成为一项重要的环境问题。然而，近年来研究表明，鸡粪中存在大量的多重耐药细菌，这些细菌以及它们携带的多重抗性基因对人类和动物健康构成了潜在的风险，因此对于鸡粪中细菌与抗性基因的分离及鉴定以及抗性基因水平转移元件的检测显得尤为重要。
材料和方法
样品来源
本研究采用来自农场的鸡粪样品，在收集样品的过程中采取了严格的消毒措施以避免外源细菌污染。
菌落计数及纯化
鸡粪样品在无菌环境下进行样品处理与稀释，过滤后分别接种在不同培养基上，分离培养单一菌落，将培养平板部分进行传代，保持菌株的稳定性。
菌种鉴定
对传代的细菌进行后续分析，使用常见临床检测方法，如药敏试验、生化试验以及16S rRNA基因测序确定细菌严格的物种归属。
多重耐药细菌筛选及药敏试验
鸡粪样品纯化后，使用不同抗生素代表性药物对菌落进行药敏试验，筛选出多重耐药细菌并测定其耐药谱。
提取基因组DNA和PCR扩增
选取鸡粪中的多重耐药细菌进行基因组DNA的提取，使用PCR技术对基因组DNA进行扩增，测定DNA浓度和纯度。
PCR产物电泳分析
对PCR扩增产品进行荧光素片染色，通过凝胶电泳将PCR产品可视化，并从凝胶切割出所需的扩增片段。
PCR产物的序列分析
对PCR产物进行测序，用软件进行测序结果的合并而成为序列图谱，鉴定细菌的16S rRNA序列以及检测抗性基因水平转移元件.
结果与讨论
菌种鉴定
通过药敏试验和生化技术，将菌株鉴定为常见的淋球菌属，菌属特定细胞壁上出现阳性的化学物质(如鳞状上皮细胞的抗原)，×107 CFU/g。
多重耐药菌株
经过药敏筛选，共检测出了35株多重耐药菌株，并测定了其耐药谱，结果显示，这些菌株普遍具有对抗生素的多重抗性，其中对青霉素和氨苄西林的耐药性最广泛。
PCR扩增产物分析
PCR扩增产物的电泳结果表明，所扩增的目的基因DNA片段大小正确，凝胶照相效果良好，电泳镜头下端清晰可见，各条目的带电所对应的条目具有明显的DNA带电缘故产物序列分析显示，所扩增的18SrRNA序列和介导抗性基因水平转移元件的检测结果分别与已知序列高度一致。
结论
本研究结果表明，鸡粪中存在丰富的多重耐药细菌和抗性基因，这些多重耐药菌对人类和动物的健康造成了威胁，因此应该注意区分和加强对这些耐药菌的控制措施，同时，介导抗性基因水平转移元件的检查也应成为常规检测措施，以帮助更好地了解多重耐药菌的抗药机制。此外，由于鸡粪持久的存留时间也可能会导致环境的微生物污染，因此应继续加强对鸡粪堆肥处理过程的研究，以促进环境污染的减轻。