分析化学实验：荧光分光光度法测定硫酸奎宁含量.ppt

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实验二十八
荧光分光光度法测定硫酸奎宁含量
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内转换
S2
S1
S0
T1
吸
收
发
射
荧
光
发
射
磷
光
系间跨越3
振动弛豫
能
量
l 2
l 1
l 3
外转换
l 2
T2
内转换
振动弛豫
01
掌握荧光分光光度法的基本原理
02
学会使用F- 4500荧光分光光度计
实验目的
二、方法原理
利用荧光分析方法，测定能产生荧光的物质含量，对不能产生荧光的物质，可以利用某些具有能发生荧光基团的有机试剂，与非荧光物质形成较纯的荧光化合物，然后进行测定，是一种高灵敏度的分析方法。
定性依据：
01
激发光光谱
02
荧光光谱
03
定量依据：
04
当 l c≦,将括号项近似处理后：
05
F=  I0  l c = Kc
06
标准曲线法：
配制一系列标准浓度试样测定荧光强度，绘制标准曲线，再在相同条件下测量未知试样的荧光强度，在标准曲线上求出浓度.
比较法：
在线性范围内，测定标样和试样的荧光强度，比较.
定量方法
荧光仪器组成：
激发光源、样品池、双单色器系统、检测器。
特殊点：有两个单色器，光源与检测器通常成直角。
固定荧光波长为443 nm，从300 nm到400 nm，每间隔10 nm测定一次荧光相对强度。以波长为横坐标，荧光相对强度为纵坐标，在坐标纸上绘出激发光谱图，指出最大激发波长λmax为345 nm。
mol/L硫酸溶液为参比溶液，用10 mg/L的硫酸奎宁溶液作为测定液。
02
01
硫酸奎宁激发光谱的绘制
三、实验内容
硫酸奎宁荧光光谱的绘制
01
用10 mg/L的硫酸奎宁溶液作为测定液。
01
从380 nm到600 nm，每隔20 nm测定一次荧光相对强度。以波长为横坐标，荧光相对强度为纵坐标，在坐标纸上绘出荧光光谱图，指出最大发射波长λmax为445 nm。
01