细胞工程实验报告-鲍文英.doc

细胞工程实验报告
所在学院: 生命科学学院
年级专业:09生物科学(1)班
授课老师: 刘亚军
本科生: 鲍文英
学号: 09122014


2011年12月
烟草叶片组织培养
实验一实验前准备()
1、实验目的了解植物离体培养所用培养基的配制方法。
2、实验过程
①相关材料的准备:烟草叶片、实验药品、冰箱、天平、纯水器、酸度计、常用培养基配制用玻璃仪器及分装设备、酒精灯、镊子、解剖刀、口罩、封口膜;
②培养基母液的配制:在准备室中将MS培养基中的各种成分,按原量的20倍或200倍分别称量,定容配成培养基母液,灭菌后冷却,于冰箱中保存。这样每次使用时,按比例量取并加水稀释,制成诱芽培养液或生根培养基,培养基成分见表1;
③诱导愈伤组织培养基的配制:按表1取母液配制MS培养基(-),再向其中加NAA()和6-BA(2mg/L),即为诱导愈伤组织培养基,分装、灭菌后备用;
④无菌操作室的消毒灭菌:用过氧乙酸熏蒸灭菌,操作前开紫外灯照射30min。
3、注意事项
①趁热分装,以免培养基凝固无法转移;
②在使用提前配制的母液时,轻轻摇动盛放母液的瓶子,如果发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染,应立即淘汰这种母液,重新进行配制;
③按顺序移取培养基母液,必须用所量取的母液将量筒或移液管润洗2次。
实验二外植体的消毒灭菌()
1、实验目的了解外植体消毒原理,掌握操作过程。
2、实验原理酒精是最常用的表面消毒剂,以70%~75%酒精杀菌效果最好;升汞可以与带负电荷的蛋白质结合,使蛋白质变性,从而杀死菌体。
3、实验过程
①打开无菌操作台紫外灯照射30min;
②将用水洗净的烟草叶片放在超净工作台上的培养皿中,用解剖刀切取若干长约1cm,宽约1cm的外植体;
③%氯化汞溶液中约十分钟,期间需要不断的摇动,然后在75%的乙醇中清洗约20s。
4、注意事项
①用酒精对植物材料浸泡时应严格控制时间;
②升汞对环境危害大,使用后应做好回收工作。
实验三愈伤组织的诱导()
1、实验目的运用植物的快繁技术诱导愈伤组织,熟练掌握无菌操作。
2、实验原理本实验以及下面两个实验的理论依据是植物细胞的全能性。离体植物组织在人工诱导条件下去分化,失去其特有结构与功能变成具有未分化细胞特征,恢复到分化组织状态,形成愈伤组织,经过再分化形成具芽和根的完整植株。
3、实验过程
①接种前开无菌操作台紫外灯照射30min;
②戴上口罩,取已配制和灭菌过的培养基两瓶、灭菌的培养皿一副于无菌操作台上,向培养皿中倒入一定量的水,用于冷却镊子和解剖刀,用酒精棉球擦拭手和台面;
③在酒精灯火焰边取消毒的外植体于培养基上,每瓶1-3个,瓶口和封口膜适当靠近火焰灭菌后封住瓶口,贴上标签;
④将接种过外植体的培养瓶放在光照培养室内,培养温度为25+1℃,光照强度2000-3000LX,时间12h/d,每三到四天观察一次。
4、实验结果与分析接种后没有被细菌及霉菌污染,愈伤组织生长状况良好。
5、注意事项
①操作时不能离开火焰附近,手尽量不要经过放置外植体的培养皿上方;
②消毒灭菌后的外植