转基因动物
定义
培育技术
应用
定义
转基因动物:是指借助基因工程技术将外源基因导入受体动物染色体内,外源基因与动物基因整和后随细胞的分裂而扩增, 在体内表达并能稳定地遗传给后代的动物。
培育技术
基本原理:借助分子生物学和胚胎工程的技术,将外源目的基因在体外扩增和加工,再导入动物的早期胚胎细胞中,使其整合到染色体上,当胚胎被移植到代孕动物的输卵管或子宫中后,发育成携带有外源基因的转基因动物。
培育方法:
基因显微注射法
逆转录病毒感染法
胚胎干细胞介导法
精子载体导入法
酵母人工染色体介导的基因转移
细胞核移植技术
雄原核显微注射法定义: 以单细胞受精卵为靶细胞,利用显微注射技术将构建好的载体DNA直接注射入受精卵的原核,再将接受注射的受精卵移入假孕母体输卵管继续发育获得转基因动物个体。
目前应用较广泛, 最早最经典的方法
基因显微注射法
目的基因的制备与纯化
卵供体母鼠和假孕母鼠的准备
超排取卵
基因显微注射(雄原核)
胚胎移植
目的基因的表达检测
建系
目的基因的制备与纯化
目的基因的来源
目的基因的分离与纯化
通过限制性内切酶分离某一基因
通过逆转录法得到cDNA
人工合成DNA片段
聚合酶链式反应扩增特定的DNA片段
此法是利用限制性核酸内切酶能识别DNA的特异序列,并在识别位点或其周围切割双链DNA的特性。
通过限制性内切酶分离某一基因
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