5-7 PCR技术(DW).ppt

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余兴龙
PCR实验技术
参考书
-实验指南(第二版),第14章
-实验指南(第三版),第8章
3. PCR最新技术原理、方法及应用。黄留玉主编,化学工业出版社,2005年
-理论与方法。张学敏主编。军事医学科学出版社
Kary B. Mullis(1944-)
Kary Mullis
发明过程
Mullis 在“偶然想出的聚合酶链反应”一文中写到:
“这种简单得令人惊奇,可以无限量地拷贝DNA片段的方法是在不可想象的情况下,即驾车行驶在月色下的加利福尼亚山间公路上时想出来的”(1983年)。
发展过程:
开始使用大肠杆菌DNA聚合酶Klenow片段,该酶不耐热,每次加热变性DNA后都要重新补加。耗时、费力、易出错。耐热DNA聚合酶的应用使得自动化成为可能。
专利官司
1987年美国专利局专利授权
1989年,DuPont异议,大小公司对簿公堂,将决定谁将获得诺贝尔奖。DuPont理由是,1971年PCR的雏形已由Khorana一系列文章阐明,并公布于众,应当是公共产权。斯坦福大学Kornberg(研究DNA聚合酶获诺贝尔奖)也认为,任何具备生物技术知识的人都可以从Khorana等的文章中推知如何操作PCR。
美国专利局驳回DuPont异议,地方法院判属Cetus
Cetus获胜后马上反诉,指出DuPont已侵犯另一项与PCR有关的专利并要求对方赔偿以及不再销售与PCR有关试剂和仪器
DNA的结构
5′······GTAAATGCTGCATG ·····3′
3′······AGGCATTTACGACGTAC ····· 5′
方响性:5′ 3′