SOD、MDA、GSH.doc

改良的盐酸羟胺法测生物样品SOD活性
SOD(T-SOD)活力测定:
原理:羟胺在有氧环境下发生自氧化可产生超氧阴离子,产生的超氧阴离子可由NBT还原率而检测,在SOD存在下,超氧阴离子被分解,NBT还原被抑制。因此,用比色法测定NBT还原产物可以间接反映SOD的酶活力。
仪器:可见光分光光度计
试剂:75mM Na2CO3 /NaHCO3缓冲液(pH=, EDTA-Na2)
5mM NH2OH·HCl
%(V/V)Triton X-100
NBT
甲酸
步骤:
用1:5组织匀浆(血清可直接取样),3000rpm离心30min,
按顺序加入如下试剂:
75mM Na2CO3 /NaHCO3缓冲液
5mM NH2OH·HCl
%(V/V)Triton X-100
NBT
立即计时,于37℃恒温水浴10min(避光)。
。
E560nM比色,记录OD值。
计算结果:
酶单位表示:在本实验条件下,抑制率达50%所对应的提取液SOD含量即一个SOD单位(U)。可用每g蛋白(U/g protein)表示。
Mn-SOD活性测定:
基于氰化物抑制CuZn-SOD非Mn-SOD活性的原理,,浓度达到2mM,。37℃孵育45分钟,以抑制CuZn-SOD。其余操作、步骤、计算方法同上。
CuZn-SOD酶活力= T-SOD酶活力单位— Mn-SOD酶活力
注意事项:
对照组(非酶管)取样品同体积的三蒸水,其余步骤同样品。
若测血中SOD,可取血清20ul,其余地操作步骤同上。
来自:第四军医大学硕士王建宏学位论文《诊断剂量超声对鼠胚胎和人绒毛脂质过氧化及超微结构的影响》。导师:钱蕴秋。单位及专业:西京医院超声诊断科,超声诊断学。-。
参考秦绪军、常耀明硕士论文
原始参考文献:
Kono Y. Generation of superoxide radical during autoxidation of hydroxylamine and an assay for superoxide dismutase. Arch Biochem Biophys. 1978 Feb; 186(1):189-95.
或者Yasuhisa Kono. Generation of superoxide radical during autoxidation of hydroxylamine and an assay for superoxide dismutase. Anchives of Biochemistry and Biophysics. 1978 Feb; 186(1):189-95.
Yisun et al. Free Rad ms 1988; 4:299-309.
刘树元制作
2003-5-7
荧光法测定血清脂质过氧化产物(MDA)
原理:过氧化脂质降解产物中的丙二醛(简称MDA),可与硫代巴比妥酸(简称TBA)缩合,形成红色产物。此红色物质在波长532nm有极大吸收峰,可用分光光度法进行定量测定