半夏种质资源的随机扩增多态性DNA技术分析论文.doc

半夏种质资源的随机扩增多态性DNA技术分析论文.doc半夏种质资源的随机扩增多态性DNA技术分析论文
.freelplasm resources of Pinellia ternata on molecular level. Methods The geic diversity of P. ternata 21 different populations arkers. Results A total of 162 products plified by 29 10-mer arbitrary primers, 123 (%) products orphic. The results revealed the abundant geic diversity in P. ternata 21 different populations. The cluster analysis using UPGMA method shouch geic diversity on molecular level among the germplasm resources of P. ternata. RAPD markers could be effective tools to construct DNA fingerprintings of P. ternata.

Key amplified polymorphism DNA,RAPD)是以PCR为基础的快速简便的分子标记技术,因其费用不高,DNA用量少、不需预知研究对象的基因组序列、PCR引物无种属限制等优点,目前已应用于人参2、石斛3等药用植物的遗传多样性研究。本研究选取了21个野生半夏居群进行了RAPD-PCR扩增分析,构建遗传聚类树状图对半夏居群间的遗传关系进行了研究,旨在探讨其居群间的遗传关系,为半夏种质资源的保护、合理开发利用和新品种选育提供有价值的资料,也为半夏药材DNA指纹图谱的构建奠定一定的基础。
1 材料与方法
药材
采自四川、重庆及陕西等地不同地点,共21份。来源详见表1。
DNA的提取
取每一居群10~ g,经消毒和洗净后,放在乳钵中加入600 μL氯仿于室温下研磨成匀浆, mL SDS抽提液100 mmoL/L Tris-HCl(pH );100 mmol/L EDTA(pH ); mol/L NaCl;%(yCyclerTM PCR仪上进行。反应总体积25 μL,内含1×PCR buffer, mmol/L MgCl2,1 U Taq酶, μmol/L引物;100 ng模板DNA, mmol/L。扩增前94 ℃预变性3 min,每循环在94 ℃变性1 min,36 ℃退火1 min,72 ℃延伸2 min,共45个循环,完成最后一个循环后,在72 ℃保温10 min,然后在4 ℃保存。%琼脂糖凝胶上电泳分离。溴化乙锭染色,凝胶成像仪上观察照像、记录。
统计学方法
RAPD扩增产物按条带有无分别赋值,有带记为1,无带记为0。利用软件POPGENE处理得到遗传相似系数(Geic Similarities, GS)4。利用GS按不加权成对群算术平均法(uneth