转基因、基因克隆与基因敲除技术.ppt

§5、转基因、基因克隆与基因敲除技术
基因敲除技术、转基因动物模型、基因转染细胞模型、RNA干涉技术
基因功能是在由细胞组成的器官组织中,在多层次的复杂生命体中实现的,因此对基因功能的研究只有在活体中才能接近真实的再现一个特定基因的表达和导致的后果;这是目前层次最高的实验体系,最好利用实验动物模型或细胞模型。--基因功能分析的方法
。
前言:
一、利用转基因模型研究基因的功能
概述
1、转基因技术是指将外源基因导入受精卵细胞,胚胎干细胞中(或其它受体细胞),通过外源基因与受体细胞染色体DNA之间随机重组的发生而将外源基因插入到受体细胞染色体DNA分子上的过程。
2、利用转基因技术可以制备转基因动物(植物)或转基因细胞。并被转入外源基因的动物或细胞能将将外源基因遗传给后代。
3、利用动物(植物,细胞)模型研究未知基因的功能,就是将某一基因从动物基因组中剔除或将外源基因引入动物基因组(或让基因组中的某一基因过表达),产生在遗传上经过基因工程修饰(改造)的动物,实现在整体动物、细胞或分子水平上认识基因的功能或人类疾病发生的分子机制。
(一)、转基因动物
A、转基因动物:是指应用转基因技术培育出的携带外源基因的动物。
B、制作转基因动物的操作过程:
1、转基因载体的构建;
2、将转基因载体导入受精卵细胞或胚胎干细胞;
3、将转基因受精卵或胚胎干细胞植入假孕小鼠子宫内
4、对转基因动物进行鉴定。
1982年,首次成功获得转基因小鼠
受精卵或着床前的胚胎干细胞
活体组织检查
转基因载体
结构基因
报告基因
增强子
启动子
受精
全能性细胞
注射
植入
假孕小鼠
后代
Southern blot
RT-PCR
Western blot
转基因小鼠
C、转基因动物实例:
转基因小鼠:获得来自大鼠的生长激素基因
我国首例转基因牛“滔滔”
1999,3,上海医学遗传研究所,曾溢滔,黄淑帧教授;携带人血清白蛋白。