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2012-2013年第2学期2010级预防医学本科专业任课教师:杨威特
课程
卫生学检测技术
题目
2,6—二氯酚靛酚滴定法测定维生素C含量
学时
讲授
实验
5
练习
行课时间
2013 年6 月7日第 1 至5节
课次
第8次
教材
自编教材
教具
电子课件
教学
目的
要求
掌握:定量测定维生素C的原理和方法
熟悉:微量滴定法的基本操作技术
教学重点
难点及其
解决方案
重点:定量测定维生素C的原理和方法
难点:滴定终点的判断
解决方案:通过实验让学生了解定量测定维生素C的原理和方法,并能采取过滤等方法排除影响判断滴定终点的干扰因素。
参考
资料
人民卫生出版社出版,梁康主编《卫生理化检验技术》
华中科技大学出版社出版,运珞珈、朱业湘主编《卫生理化检验与微生物学检验》
实施
情况
小结
教研室主任签名: 2013 年月日
成都医学院教案续页
教学过程、内容及时间分配
教学方法与手段
2,6—二氯酚靛酚滴定法测定维生素C含量
一、目的
。
。
二、原理
维生素C是人类营养中最重要的维生素之一,缺少它时会产生坏血病,因此又称为抗坏血酸(ascorbic acid)。它对物质代谢的调节具有重要的作用。近年来,发现它有增强机体对肿瘤的抵抗力,并具有对化学致癌物的阻断作用。
维生素C是具有L系糖构型的不饱和多羟基物,属于水溶性维生素。它分布很广,植物的绿色部分及许多水果(如橘子、苹果、草莓、山楂等)、蔬菜(黄瓜、洋白菜、西红柿等)中的含量更为丰富。
维生素C(抗坏血酸)具有很强的还原性,能将染料2,6一二氯酚靛酚还原成无色,而抗坏血酸本身被氧化成脱氢抗坏血酸。
氧化型2,6一二氯酚靛酚在酸性溶液中呈粉红色,在中性或碱性溶液中呈蓝色,当用此染料滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时,在抗坏血酸未全部氧化前,则滴下染料立即被还原成无色,一旦溶液中的抗坏血酸全部被氧化时,则滴下的染料立即使溶液显示粉红色,此时为滴定终点,即表示溶液中的抗坏血酸刚刚被氧化完全,从滴定时2,6一二氯酚靛酚标准液的消耗量,可以计算出被检物质中抗坏血酸的含量。
三、材料、试剂与器具
(一)新鲜的水果
(二)试剂
1、标准抗坏血酸溶液:准确称取50毫克纯抗坏血酸,溶于1%的草酸溶液中,并稀释至500毫升,贮棕色瓶,冷藏保存,最好临用时配制。
讲解法
2、2%草酸溶液:草酸2克,溶于100毫升蒸馏水中。
3、1%草酸溶液:1克草酸溶于100毫升的蒸馏水中。
4、% 2,6 一二氯酚靛溶液:溶50毫克2,6一二氯酚靛于300毫升含有104克 NaHCO3的热水中,冷却后加水稀释至500毫升,滤去不溶物,贮于棕色瓶内。(4℃约可保存1周)每次临用时以标准抗坏血酸溶液标定。
(三)器具
1、锥形瓶(50~100毫升)
2、移液管(1毫升,10毫升)
3、容量瓶(100毫升)
4、微量滴定管(3毫升或5毫升)
四、操作步骤
(一)提取
水洗净新鲜的水果,用吸水纸吸干表面水分,然后称取5克剪碎,加2%的草酸5毫升,置研钵中研成浆,倒入100毫升的容量瓶内,用2%草酸洗涤数次,最后定容至刻度,充分混匀后过滤,弃去最初几毫升滤液。
(二)滴定
1、标定2,6一二氯酚靛酚溶液的浓度:
量取标准维生素C溶液1ml,加9ml 1%草酸加入50ml锥形瓶中,同时量取10ml草酸加入另一个50ml锥形瓶中作空白对照,用已标定的2,6一二氯酚靛酚滴定至粉红色出现,15秒不退色。记录所用的毫升数,计算每毫升2,6一二氯酚靛酚所能氧化维生素C的毫克数(K)。
2、样品的测定:
取50ml锥形瓶2个,分别加入滤液10ml,用已标定的2,6
讲解法
演示法
实践法
一二氯酚靛酚溶液滴定至终点,以微红色能保持15秒不退色为止,整个滴定过程宜迅速,不宜超过2min,空白滴定方法同前,记录两次滴定所得的结果,求平均值。
(三)结果计算
根据实验数据计算出每100g样品的维生素C含量:
维生素C(mg/100g样品)=×100
式中:V1为滴定样品液所用去染料体积(ml);
V2为滴定空白所用去染料体积(ml);
V3为样品测定时所用滤液体积(10ml);
V为样品提取液的总体积;
K为1毫升染料能氧化维生素C的量(mg);
W为称取样品重量(g )。
五、注意事项
,因样品内一般都含有一些能将2,6一二氯酚靛酚还原的其它物质,尽管它们还原比染料的能力一般较维生素C弱。
~4ml 之间,否则