深圳龙岗同乐商圈商业市场调研报告PPT培训课件.ppt

材料与方法
材料
(一) 实验试剂
2,4,6-三硝基苯磺酸购于 Sigma 公司
(二) 实验仪器
同第三章;FCOM-6124 型半自动生化分析仪,德国倍肯公司
(三) 实验日粮组成与营养水平
基础日粮按照 NRC(1998)营养标准配制,如表 4-1。
(四) 实验动物
SD 大鼠购于哈尔滨医科大学实验动物中心。
方法
(一) 实验动物分组与处理
选取体重 220±10 g 的 SD 大鼠 400 只,雌雄各半,分别采用醋酸和 TNBS/乙醇两种方法复
制大鼠结肠炎模型。动物饲养于空调室内,室温 20±2℃,相对湿度 40%-50%,基础日粮如表
4-1,颗粒饲料喂养,自由饮水。将大鼠随机分为 4 组:Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组。Ⅰ组和Ⅱ组
造模前饲喂 4 周鱼油(%的鱼油)后,Ⅰ组继续饲喂含 %鱼油日粮,而Ⅱ组饲喂基础日粮;
Ⅲ组在造模后饲喂含 %鱼油日粮,而Ⅳ组造模后饲喂基础日粮。
(二) 大鼠结肠炎模型的建立
通过广泛文献检索和多次预实验结果,我们选取醋酸和 2,4,6-三硝基苯磺酸/乙醇灌肠法
两种方法建立结肠炎大鼠实验模型。
醋酸模型的建立参考文献
[140-142]
,大鼠禁食不禁水 24h,乙醚轻微麻醉后,用外径为 2mm
的硅胶管插入大鼠肛门内约 8cm,经管内注入 10%的醋酸溶液 2ml,10-20s 后注入生理盐水 5ml
以消除醋酸的作用,自然清醒后放回笼内正常饲养。
TNBS/乙醇模型的建立参考文献
[143]
复制大鼠结肠炎模型,大鼠禁食不禁水 24h,乙醚轻
微麻醉后,用外径为 2mm 的硅胶管插入大鼠肛门内约 8cm,经管内注入 TNBS/50%乙醇溶液
,倒立 30s,捏紧肛门平放 5min 即可,自然清醒后放回笼内正常饲养,实验期为 28d。
(三) 样品的采集与处理
分别于模型复制成功第 24h、7d、14d 和 28d 后称重、无菌采取血液后处死大鼠。大鼠处死
后,迅速剖取结肠,摘取距肛门 6-8cm 病变处结肠 4-7cm,用于结肠黏膜损伤的观察和结肠病理
学变化的观察。沿肠系膜纵轴剪开肠腔,冰生理盐水冲洗干净后将肠黏膜向上平铺于平板上,
大头针固定后,用放大镜观察炎症及溃疡发生情况(进行肠道黏膜损伤评分观察)。将采取的部
分结肠组织,固定、石蜡包埋,病理切片(HE 染色),显微镜下观察大鼠结肠病理学变化情况
(四) 观察指标
(1) 结肠炎大鼠炎症的观察
观察记录大鼠体重、饮食、粪便性状、死亡率、稀便发生率、皮毛、活动等情况。同时采
取粪便测定潜血情况(联苯胺冰醋酸法),综合体重、粪便性状及隐血情况对大鼠疾病活动指数
(The Disease Activity Index,DAI)进行评分
[144]
(表 4-2);肉眼观察结肠黏膜损伤大体情况,
参考结肠黏膜损伤程度评分标准
[145-148]
(表 4-3);结肠组织 HE 染色后光镜下观察结肠组织损
伤情况,参考肠组织学损伤评分标准
[149-150]
(表 4-4)。
表 4-2 DAI 评分标准
Table 4-2 The standards of DAI score
评分体重减轻(%) 粪便性状粪潜血
0 (–) 正常正常
1 1–5
2 5–10 松软潜血(+)
3 11–15
4 >15 稀便肉眼潜血
附:粪便性状评分标准(1)正常粪便:成形颗粒样粪便;
(2)松软粪便:不豁附于肛门的糊状、半成形粪便;
(3)稀便:可豁附于肛门的稀水样便
表 4-3 结肠黏膜损伤程度评分标准
Table 4-3 The standards of colonic mucosal injury score
评分大体形态
0 黏膜无水肿、充血及溃疡,肠壁无粘连及增生
1 轻度的黏膜水肿、充血、无溃疡
2 黏膜充血、水肿、糜烂、无溃疡
3 黏膜充血、水肿、糜烂、单个溃疡
4 黏膜充血、水肿、糜烂、多个溃疡
5
黏膜充血、水肿、重度糜烂、多个溃疡,
有>1cm
2
溃疡
(4) 数据处理
实验结果以
x
x ± S表示,。