土霉素、金霉素和四环素的检测方法.doc

土霉素、金霉素和四环素的检测方法
1、分析目标化合物:
土霉素,金霉素,四环素
2、仪器设备:
带荧光检测器的高效液相色谱仪,
3、试剂:
除下列试剂外,使用附录2所列试剂,
咪唑:特级
咪唑缓冲溶液:将咪唑、EDTA
和乙酸镁溶解在800mL水中,用乙酸调节后,加水至1,000mL,
含有乙二胺四乙酸的柠檬酸缓冲溶液:第1液:将柠檬酸溶解在水中至1,000mL,第2液:将磷酸氢二钠溶解在水中至1,000mL,在乙二胺四乙酸中加入307mL第1液和193mL第2液混合的溶液溶解,
苯乙烯二乙烯苯共聚物小柱(265mg):在内径8~9mm
聚乙烯管中填充265mg柱色谱用苯乙烯二乙烯苯共聚物或具有同等分离特性的物质,
4、标准品:
盐酸土霉素:本品含有土霉素以上效价,分解点为190
℃~194℃,
盐酸金霉素:本品含有盐酸金霉素以上效价,分解点为210℃以上,
盐酸四环素:本品含有盐酸四环素以上效力,分解点为214℃以上,
5、试验溶液的制备:
:
①肌肉、肝脏和肾脏
肌肉:尽可能除去脂肪层,搅碎混合均匀后,称取其,
肝脏和肾脏:搅碎混合均匀后,称取其,
加入30mL含有乙二胺四乙酸的柠檬酸缓冲溶液,搅拌1分钟后,以每分钟3000转离心分离10分钟,水层移入100mL分液漏斗中,离心分离管的残留物中
加入20mL含有乙二胺四乙酸的柠檬酸缓冲溶液,用振荡器激烈振荡1分钟后,按上述同样条件离心分离,合并水层于上述分液漏斗中,加入20mL正己烷,
用振荡器激烈振荡5分钟后,以每分钟3000转离心分离10分钟,分取水层,
②脂肪
脂肪:尽可能除去肌肉层,搅碎混合均匀后,称取其,
加入200mL正己烷,搅拌1分钟后,加入40mL含有乙二胺四乙酸的柠檬酸缓冲溶液,再搅拌1分钟后,以每分钟3000转离心分离10分钟,分取水层,正
己烷层中加入20mL含有乙二胺四乙酸的柠檬酸缓冲溶液,用振荡器激烈振荡1分钟后,按上述同样条件离心分离,分取水层,合并于先分取的水层中,

③奶
称取样品,加入30mL含有乙二胺四乙酸的柠檬酸缓冲溶液和20mL正己烷,用振荡器激烈振荡5分钟后,以每分钟3000转离心分离10分钟,分取水层,
④蛋
除去蛋壳,充分均匀后,称取其,加入30mL含有乙二胺四乙酸的柠檬酸缓冲溶液,均匀后,加入100mL正己烷,搅拌1分钟后,以每分钟3000
转离心分离10分钟,水层移入100mL分液漏斗中,离心管的残留物中加入20mL含有乙二胺四乙酸的柠檬酸缓冲溶液,用振荡器激烈振荡1分钟后,按上述
同样条件离心分离,合并水层于分液漏斗中,加入20mL正己烷,用振荡器振荡5分钟后,以每分钟3000转离心分离10分钟,分取水层,
⑤鱼贝类
有壳贝类:除去壳,搅碎混合均匀后,称取其,
其它的鱼贝类:搅碎混合均匀后,称取其,
加入30mL含有乙二胺四乙酸的柠檬酸缓冲溶液,搅拌1分钟后,以每分钟3000转离心分离10分钟,水层移入100mL分液漏斗中,离心管的残留物中加入20mL含有乙二胺四乙酸的柠檬酸缓冲溶液,用振荡器激烈振荡1分钟后,按上述同样条件离心分离,合并水层于分液漏斗中,加入20mL正己烷,