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二次结构砌筑方案.doc博士论文 S和M抗原特异性细胞免疫反应及免疫记忆的研究
的结合,以及M蛋白与N蛋白的结合在SARS—CoV装配、出芽过程中发挥着重要的作用。M蛋白包括3个结构域:一个短的N末端(胞外区)、跨膜区和一个较大的C末端(胞浆区)。动物实验表明, M蛋白的DNA疫苗不仅能诱导体液免疫反应产生高水平的抗体,而且还可诱导产生强烈的Tht反应和迟发型超敏反应(DTH)。因此,M蛋白也被认为是研发SARS亚单位疫苗的候选抗原蛋白。
SARS流行期间,没有任何~,。用灭活的 SARS—CoV作为抗原,对SARS患者进行了血清特异性IgG和IgM抗体的动态观察。发现出现症状第2周, 和IgG抗体,IgG抗体在第4周达到高峰,且抗体滴度连续3个月维持在较高水平。且静脉注射康复期SARS患者的血清能有效治疗急性期SARS病人。可见, 体液免疫在机体抵抗SARS—CoV感染过程中发挥着一定的保护作用。以往研究表明,机体抗病毒感染最有效的武器是特异性细胞免疫反应。
在SARS患者发病早期外周血中淋巴细胞的计数减少,CD4+和CD8+T细胞绝对值显著下降,而且患者外周血T细胞亚群的计数与病情的严重程度密切相关。相反,SARS患者外周血中的B淋巴细胞在SARS的整个发病过程中基本保持不变或轻微升高。提示SARS—CoV攻击的靶细胞似乎主要是T淋巴细胞。进一步研究发现,无论是治愈组还是死亡组CD3+、CD4+、CD8+T细胞绝对值在发病初的15天内均显著降低。发病15天后治愈组CD3+、CD4+、CD8+细胞计数显著上升并逐渐恢复至正常;而死亡组CD3+、CD4+、CD8+绝对值不但没有恢复, 反而呈进行性下降趋势。这些结果提示T细胞在SARS病情的演变过程中可能有重要的意义。但CD4+和CD8+ 的特异性细胞免疫应答状态。目前针对SARS—CoV感染者特异性细胞免疫应答的研究报道国内外尚少。 CD8+T细胞表位鉴定工作,+者仅占50%,所以应用 +SARS患者的特异性CD8+T细胞的免疫应答, +T细胞的免疫应答状态。
博.】二论文 S和M抗原特异性细胞免疫反应及免疫记忆的研究
为此,我们研究了完全康复期SARS患者外周血CD4+和CD8+T细胞对 SARS—CoV S和M抗原的特异性细胞免疫反应。首先,我们分离了外周血单个核细胞(PBMCs), S多肽混合物或M多肽混合物刺激后,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、酶联免疫斑点试验(ELISpot)及流式细胞检测技术(FACS),分别从整体水平、。本文第一部分的结果显示,在无S 抗原刺激的情况下,无论是完全康复期SARS患者还是健康人外周血中PBMCs
,。当SARS。CoV S多肽混合物刺激后,SARS康复期患者的 ,,产生细胞。与健康人刺激组及康复期SARS患者未刺激组相比,差异具有统计学意义(尸<)。从实验结果可以看出, S抗原特异性记忆性T淋巴细胞。FACS结果进一步显示,完全康复期SARS患者外周血中的CD4+和CD8+ 。根
,CD4+T细胞可分为3个亚群:IFN吖。IL一2+,IFN.,+ 和IFN—Y+’。表型分析显示, S抗原特异性记忆CD4+T细胞为 R7+CD62L’,属于中央型记忆细胞。相反, S
抗原特异性CD8+T细胞属于效应型记忆细胞,R7’CD62L。本文的第二部分,我们在康复期SARS患者外周血中也检测到较高频率的
M抗原特异性记忆CD4+和CD8+T细胞。此外, M蛋白中鉴定出4个主要的T细胞优势表位肽:p21~44,p65~91,p117~140及 p200~220。且用这4个多肽刺激完全康复期SARS患者PBMCs,外周血中CD4+ 和CD8+T细胞