_ 60_Co照射后巨噬细胞对血管内皮细胞生物学特性影响的研究.pdf

第三军医大学
硕士学位论文
<'60>Co照射后巨噬细胞对血管内皮细胞生物学特性影响的研究
姓名:明佳
申请学位级别:硕士
专业:外科学(烧伤)
指导教师:刘旭盛
20040501
第三军医大学硕士学位论文
照射后巨噬细胞对血管内皮细胞
生物学特性影响的研究

摘要

慢性难愈合的伤口或创面在临床较为常见目前临床上尚缺乏简便有效的治疗
方法究其根源是因为我们对创面难愈合的机理尚未完全明了因此对创面愈合机理
的研究受到越来越多的重视本课题希望通过研究难愈合创面中巨噬细胞对血管内皮
细胞的作用揭示难愈合创面的可能机制以及巨噬细胞在其中的地位和作用
各种创伤修复均要经过炎症期增生期和塑形期在增生期新生的肉芽组织通
过丰富的新生毛细血管网络向局部组织提供氧和所需的营养物质血管内皮细胞作为
血管的重要组成成分受许多血管生成因子的作用而发生趋化迁移和增殖在局部
形成新的血管芽这些血管芽相互吻合再通导致创面的肉芽化促进毛细血管网
的形成因而血管内皮细胞是创面修复的中心环节之一作为创面修复中的另一种重
要细胞——巨噬细胞由单核细胞游走到外周组织后分化而成它不仅在创面愈合的
炎症期发挥提呈抗原吞噬消化杀伤作用而且还可以合成分泌多种生物活性
介质促进中性粒细胞成纤维细胞成骨细胞和血管内皮细胞等多种细胞的迁移
增生促进血管和肉芽组织的形成从而在创面愈合的炎症期和增生期均发挥重要作
用也因此受到生理性和病理性血管生成的研究者的极大关注因此研究在创面愈
合中巨噬细胞对血管内皮细胞的作用有着重要的理论和实践意义
大剂量的电离辐射可以引起创面难愈合难愈合的机制目前尚不甚明了很早就
知道电离辐射可以引起机体的炎症反应这种炎症反应大部分是由于放射后表皮细胞
内皮细胞成纤维细胞和单核巨噬细胞等细胞间的相互作用通过自分泌或旁分泌产
生的炎性细胞因子介导的这些炎性细胞因子与大剂量电离辐射所致的创面难愈合有
着直接或间接的关系巨噬细胞作为这些炎性细胞因子的重要分泌细胞之一在电离
辐射所致的难愈合创面中的具体作用和地位不是很清楚 TGF- 1 是巨噬细胞分泌的
细胞因子之一对于体外血管内皮细胞的血管生成作用显示出剂量依赖性并具有双
向调节作用低浓度(< l)的 TGF- 1 可以促进内皮细胞的迁移加强血管生成
而高浓度(>)的 TGF- 1 则抑制内皮细胞的迁移抑制由 bFGF VEGF 所诱导
的内皮细胞的血管生成作用抑制血管生成 VEGF 是体内重要的血管生成诱导因子
7
第三军医大学硕士学位论文
之一它可以刺激内皮细胞合成蛋白酶促进内皮细胞迁移和增殖它介导的信号转
导是通过 VEGF 受体完成的目前认为参与血管生成的 VEGFR 主要有两个
VEGFR-1(Flt -1)和 VEGFR-2 (KDR / Flk-1) VEGFR-1 主要与 EC 的粘附维持血管通
透性有关 VEGFR-2 与 EC 增殖分化有关在 VEGF 刺激下 KDR 可以迅速被磷
酸化磷酸化的 KDR 通过激活 PKC- MAPK 旁路促进内皮细胞的有丝分裂和增殖
同时活化的 KDR 还可以通过激活 PI3K/Akt,Ras/Raf/MEK/ERK 等通路提高凋亡调
节蛋白 Bcl-2/Bcl-XL Survivin/XIAP NO 等的浓度从而抑制内皮细胞的凋亡促
进内皮细胞的存活
因此研究放射损伤条件下巨噬细胞影响内皮细胞生物学性状的可能机制以
及TGF- 1和VEGF/VEGFR在其中的作用有利于丰富细胞网络和创面修复理论深
入认识难愈创面的机理进而为促进创面愈合和调节病理状态下的血管生成提供理论
基础为下一步更深入的研究难愈创面机理寻找促愈措施和调节血管生成提供理论
依据
本课题为国家重点基础研究发展规划项目严重创伤早期全身性损害与组织修复
的基础研究中创伤修复失控发生机制研究的子课题
本课题首先探讨了脂多糖(LPS)作为巨噬细胞 U937 刺激剂的最佳刺激浓度然后
建立了人巨噬细胞系(U937)分别和人脐静脉内皮细胞系 ECV 304 原代培养的脐静
脉内皮细胞(HUVEC)的共培养模型同时观察了在 12Gy60Co 射线照射后血管内皮
细胞在有或无 U937 作用下的不同变化分别运用倒置显微镜和 HE 染色的方法观察
了巨噬细胞对两种细胞形态学的影响采用 MTT 法观察对细胞增殖的影响采用流
式细胞技术测定细胞周期和细胞凋亡的变化采用 ELISA 法检测细胞分泌 VEGF
TGF- 1 的变化采用免疫荧光+流式细胞技术和 RT-PCR 法检测血管内皮细胞膜上
VEGF 受体 KDR