核苷酸代谢.ppt

核酸代谢
本章重点讨论核酸酶的类别和特点,对核苷酸的生物合成和分解代谢作一般介绍。
第一节核酸的酶促降解
返回
第三节核苷酸的合成代谢
第二节核苷酸的分解代谢
第一节核酸的酶促降解
一、核酸酶
二、限制性内切酶
核酸酶核苷酸酶核苷磷酸化酶
核酸核苷酸核苷碱基+戊糖-1-P
磷酸
核酸酶
1、核酸酶的分类
(1)根据对底物的专一性分为
(2)根据切割位点分为
核糖核酸酶(RNase)
脱氧核糖核酸酶(DNase)
非特异性核酸酶
核酸内切酶
核酸外切酶
2、核酸酶的作用特点
外切核酸酶对核酸的水解位点
5´
p
p
p
p
OH
B
p
p
p
p
3´
B
B
B
B
B
B
B
牛脾磷酸二酯酶( 5´端外切5得3)
蛇毒磷酸二酯酶( 3´端外切3得5)
内切核酸酶对RNA的水解位点示意图
5´
p
p
p
p
OH
Py
Pu
Py
Py
1´
p
p
p
G
A
C
U
p
p
p
G
A
3´
RNAase I
RNAase I
RNAase T1
RNAase T1
Pu :嘌呤 Py:嘧啶
限制性内切酶
类型
命名
意义
原核生物中存在着一类能识别外源DNA双螺旋中4-8个碱基对所组成的特异的具有二重旋转对称性的回文序列,并在此序列的某位点水解DNA双螺旋链,产生粘性末端或平末端,这类酶称为限制性内切酶(ristriction endonuclease)。
常用的DNA限制性内切酶的专一性
酶
辨认的序列和切口
说明
‥‥A G C T ‥‥
‥‥T C G A ‥‥
‥‥G G A T C C ‥‥
‥‥C C T A G G ‥‥
‥‥A G A T C T ‥‥
‥‥T C T A G A ‥‥
‥‥G A A T T C ‥‥
‥‥C T T A A G ‥‥
‥‥A A G C T T‥‥
‥‥T T C G A A ‥‥
‥‥G T C G A C ‥‥
‥‥C A G C T G ‥‥
‥‥C C C G G G ‥‥
‥‥G G G C C C ‥‥
Bam H I
Alu I
Bgl I
Eco R I
Hind Ⅲ
Sal I
Sma I
四核苷酸,平端切口
六核苷酸,平端切口
六核苷酸,粘端切口
六核苷酸,粘端切口
六核苷酸,粘端切口
六核苷酸,粘端切口
六核苷酸,粘端切口
限制性内切酶类型
I型:分子量大于105,多亚基,需S-线苷蛋氨酸、ATP和Mg2+ ,识别位点与切割位点相差甚远,产物为异质,是限制与修饰相排斥的多功能酶.
Ⅱ型:分子量小于105,需Mg2+ ,切割位点位于识别位点上,产物为专一性片段,不具修饰酶功能。现在分子生物学研究所用的限制性内切酶均为此类。
ⅡI型:识别位点为5-7bp的非对称序列,切割位点在顺序之外离识别序列5-10bp,切割双链,个别也切割单链。是限制与修饰相多功能酶.
限制性内切酶的命名和意义
Eco R I
序号
属名
种名
株名
例:Eco R I,这是从大肠杆菌(Ecoli)R菌珠中分离出的一种限制性内切酶
限制性内切酶是分析染色体结构、制作DNA限制图谱、进行DNA序列测定和基因分离、基因体外重组等研究中不可缺少的工具,是一把天赐的神刀,用来解剖纤细的DNA分子。
第二节核苷酸的降解
二、嘧啶的降解
一、嘌呤的降解
核苷酸酶核苷磷酸化酶
核苷酸核苷碱基+(脱氧)戊糖-1-P
磷酸