糖尿病大鼠视网膜早期病变中PDGF.doc

糖尿病大鼠视网膜早期病变中PDGF .doc糖尿病大鼠视网膜早期病变中PDGF
刘丽娟,李茂欣,汤旭磊,高林,朱任之
【关键词】糖尿病视网膜病变
Expression of PDGFB in retina of rats RNA in the retina of diabetic rats at the early stage of diabetic retinopathy. METHODS: A total of 60 healthy adult male )大鼠视网膜中的变化规律及其作用. 方法:雄性大鼠. 分别于造模成功后1,2,3 mo末各组随机取6只大鼠,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RTPCR)方法检测PDGFB mRNA在大鼠视网膜中的表达水平;电镜观察DM大鼠视网膜超微结构的改变. 结果:随着病程的延长,视网膜中PDGFB mRNA表达水平在DM组明显升高,与正常对照组相比于造模后1 mo末时即差异具有统计学意义(P<),3 mo末时差异显著();DM大鼠视网膜超微结构的损害随病程进展逐渐加重. 结论:PDGFB mRNA在视网膜中的表达水平随DM病程进展逐步升高.
【关键词】糖尿病视网膜病变;周细胞;血小板源生长因子B; 逆转录聚合酶链反应
0引言
视网膜周细胞的渐进性功能丧失及死亡为糖尿病(diabetes melitus, DM)视网膜病变(diabetic retinopathy, DR)的早期典型病理特征. 周细胞对于保持微血管形态与功能的完整都有重要作用,缺乏周细胞将导致内皮细胞增生及血管形态异常〔1〕,并且促使DR进展〔2〕. 血小板源生长因子B(plateletderived gros公司);UVIpro凝胶成像与分析系统(华粤公司).

雄性大鼠,分笼喂养,以后每 2 o末DM大鼠组随机取2只大鼠用作电镜观察. 摘取眼球、剥离视网膜组织切成15 mm×15 mm的小块, 25 g/L戊二醛固定2 h, 10 g/L锇酸后固定1 h, 梯度乙醇脱水, 环氧树脂包埋, 聚合LKB超薄切片机切片, 醋酸双氧铀及枸椽酸铅双重染色, 于日本JEM100CX透射电镜下观察. 分别于造模后1,2,3 mo末各组取大鼠6只,称体质量、测空腹血糖后处死轻摘眼球,剥离视网膜,每2只眼为一组,将分离的视网膜置于去RNA酶的冻存管中,液氮中保存待用. Trizol提取视网膜总RNA,测定纯度及含量,10 mL/L甲醛变性凝胶电泳测定其完整性. 按Takara一步法RTPCR试剂盒说明操作,反应条件均为逆转录过程50℃ 30 min; 94℃预变性 3 min;扩增94℃ 30 s; 50℃ 30 s; 72℃ 1 min; 30个循环;72℃延伸7 min. PCR产物以15 g/L琼脂糖电泳. 以UVIpro凝胶成像与分析系统检测电泳结果,以PDGFB与βactin PCR产物DNA条带的像素亮度总和之比作为反映PDGFB mRNA水平的相对指标.
统计学处理: 数据用SPSS ,采用成组设计资料两样本均数比较t检验, 结果以x±s表示. P<.
2结果
实验组动物血糖&gt; mmol/L 26只, 食量、饮水量及尿量显著增加,尿糖均在以上;同时体质量