注射用双黄连对细菌生物膜影响研究.doc

注射用双黄连对细菌生物膜影响研究

【摘要】目的:建立大肠杆菌和金黄色葡萄球菌细菌生物膜(BBF)的模型,考察注射用双黄连对BBF形成的影响及抑制作用。方法:在特定的条件、方法下分别对细菌单独培养和细菌与提取物共同培养,通过酶标仪测量其OD值来考察BBF的生长能力。结果:注射用双黄连对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌BDF的形成均有抑制作用。
【关键词】双黄连;细菌生物膜;影响

建立大肠杆菌和金黄色葡萄球菌细菌生物膜(BBF)的模型,考察注射用双黄连对BBF形成的影响及抑制作用。
1 BBF模型的建立
,放入37℃恒温振荡器(230~240转/分钟)中培养8小时,分装在离心管中,%甘油,置于液氮中,于-80℃冰箱中冷藏保存。
大肠杆菌BBF模型建立的方法将置于-80℃冰箱中的大肠杆菌划线于NB培养基的平板上,置于恒温培养箱中,于36℃培养24小时。挑取平板上的单一菌落溶于5mlNB液体培养基中,于36℃恒温振荡器中振荡8小时,得到单克隆细菌增殖培养的菌液,备用。
将菌液稀释100倍置于96孔板中,四周为NB培养基作为空白。置于恒温培养箱中,于36
℃培养24小时,取出。将菌液倾出,用蒸馏水反复清洗后,%结晶紫染色30分钟后,将结晶紫倾出,洗净,加入1%脱氧胆酸钠溶液,30分钟后,测其600nm处的OD值。以菌液浓度为横坐标,以OD值为纵坐标,考察BBF生长情况。
影响大肠杆菌BBF生长的因素通过实验的反复摸索,我们发现影响大肠杆菌BBF生长的因素主要有以下几种:①菌种:不同的大肠杆菌菌株对BBF的影响很大,直接影响到BBF的生长与否和BBF形成的好坏。且大肠杆菌传代越多,BBF的生长情况越不好,故我们每次实验均采用大肠杆菌的第二代菌株。
②96孔板的材质:不同的细菌在不同材质的96孔板上的生长情况是不同的。我们选用了市场上常见的三种96孔板分别是进口聚氯乙烯(PVC)板,国产聚苯乙烯(PS)板,进口聚苯乙烯板,大肠杆菌分别在不同材质的96孔板上培养。结果,大肠杆菌在国产PS板上的生长情况是最好的。
③培养时间:考虑到实验操作时间的可行性,我们选定将大肠杆菌分别培养18小时、24小时、36小时,考察BBF的生长情况。结果,大肠杆菌在培养24小时后,BBF的生长情况最好。
金黄色葡萄球菌BBF的建立及影响因素金黄色葡萄球菌的BBF模型的建立方法基本上与大肠杆菌的相同。在这里就不做详细的介绍。我们仍旧分别考察了96孔板的材质、培养时间及菌液浓度等因素,最终确定金黄色葡萄球菌菌液稀释100倍、于国产PS板上培养24小时,BBF的生长的最好且稳定。
2 注射用双黄连对BBF的影响
培养方法的建立我们建立两种方法分别考察药物对BBF形成的影响及对BBF的抑制作用。96孔板的点样方法1:四周为菌液(NB培养基)。B行加入180μl菌液(NB培养基),C~G行每孔各加入100μl菌液(NB培养基),B行每孔用移液枪加入20μl药液,混匀,用多通道移液枪从B行吸出100μl移入C行,混匀,再从C行吸出100μl移入D行,依此类推至H行,吸出100μl