放射诱导定向基因治疗阻断肺放射性纤维化的体外实验研究(1).pdf

复旦大学
硕士学位论文
放射诱导定向基因治疗阻断肺放射性纤维化的体外实验研究
姓名:蔡旭伟
申请学位级别:硕士
专业:肿瘤学
指导教师:傅小龙
20040426
放射诱导定向基因治疗阻断肺放射性纤维化的体外实验研究纤维化的发生率和程度。因此若能阻断肺的放射性纤维化过程,将提高肺的放射耐受性,从而提高胸部恶性肿瘤放疗疗效。众多研究已是示狟材料与方法:以獂州表达试剂盒为基础,应用分子克隆技术,将穿梭质摘瘤,%患者需要接受放疗,肿瘤区域物理或生物效应剂量的提高将有助于提高肿瘤局控率和生存率,但放射剂量的提高也将相应增加放疗严重并发症放射性肺转化生长是放射性肺纤维化发生发展的重要作用因子,而狟信号传导通路可被鞍姿瓒希已芯康缫阎な低ü齋蛋白阻断淖饔每梢源锏椒乐狗蜗宋⑸⒄沟哪康摹5玊—着广泛的生理功能,无目标地阻断其作用必将产生一系列其它生理病理变化。藕糯ǖ纪返淖饔镁窒抻诜派湎哒肇娣段冢佣诖锏椒乐狗射性肺纤维化目的的同时畲笙薅鹊亟档土朔⑸碌牟±肀浠膇苄浴为了证实这一’没想的可行性,我们利用分子克隆技术构建出含有活性及表达的鞍谆钚裕〉昧肆钊斯奈璧慕峁目的:构建含有蚱舳雍蚐的重组复制缺陷型腺病毒,研究放射线诱导基因启动于调控逋獗泶锏氖奔洹⒓亮啃вΓ⒀橹藕糯ǖ纪反佣瓒铣上宋胞胶原合成的生物学活性。梭质粒多克隆位点内,与腺病毒刈椋笤贖赴薪邪啊扩增,最后纯化测定病毒滴度。用构建的重组腺瘸毒感染成纤维细胞,经不同剂量深部哒丈浜笤诓煌时问裂解细胞收集蛋白,通过榆测鞍妆泶锪浚匝芯縳线歪组腺病毒感染成纤维细胞,经深部哒丈浜笸ü庖呦赴Х术课题受国家自然科学基金项目资助要胸部肿瘤中,食管癌、非小细胞肺癌是严重危害国入健康常见的两种恶性肿谙赴诘谔迥谟缙谏し从σ蜃虻钠舳涌稍诘缋敕娲碳诱导位因的表达,若能通过该启动子调控虻谋泶铮蚩梢越玈蛋白阻启动子和的重组复制缺陷型腺病毒,在成纤维细胞内研究启动子体外表达的鞍资欠窬哂凶瓒蟃一粒的舳臃晃狤启动予,再将亚克隆至穿照射激活舳拥骺豐体外表达的时间、剂量效应。因子断甋狟复盹人学蝌属肿癌医院硕士论义
结论一述结果表明,通过基因工程制备的重组复制缺陷型腺病毒具有生物学活糠种由了讣剖值进行定量比较。的重组复制缺陷型腺病毒2《镜味任关键词珽法检测鞍自谙赴诘谋泶锒ㄎ唬上宋赴倬璗—,采用液体闪烁计数法测定结果:经酶切、安庑蚯┒ㄖな党晒菇撕珽基因启动子和存在一定的时问、剂量差异:实验组中鞍妆泶锪克孀耪丈浼亮康脑黾而增加,在剂量为之问维持一个较高的表达水平,高于对照纽相应剂剂量照射后实验组湮衷谝桓鼋细咚剑灾哂诙哉兆轸细胞免疫化学结果显示内源性及外源性鞍妆泶锒级ㄎ欢细胞浆内。,空白组滴胧笛樽槲廾飨圆畋,说明实验组成纤维细胞胶原合成量明显低于对照组,与基石;凰较嗟薄性,在感染成纤维细胞后可通过放射线激活启动予调控碳こ上宋赴涸铣稍黾拥淖饔谩NO乱徊窖芯扛弥刈腺病毒是否能阻断小鼠放射性肺纤维化的动物实验奠定了坚实的基础。蚱舳樱俨《荆派湫灾紫宋闹瘟碳ず笸ü感染重组腺病毒的靶细胞经不同剂量的深部哒丈浜骃蛋白表达量量点处的鞍琢到孕∮∮贠蟊泶锪控⑹枷陆怠同位素—觳饨峁允臼笛樽閏值为,对照组滴两者有明显差别—.懿饨峁允靖髯榧湎赴鲋衬芰ξ廾飨圆畋表达蛋白阻断畃。癟痬—复』』搜Ц绞糁琢鲆皆核秎畚
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即会出现放射性肺纤维化,纤维化程度随着剂量的增加而加重,当个月出现,为不可逆的进展性病变,于旰笾鸾デ饔谄轿取>植糠握丈浼亮看时则出现严重的肺纤维化症状和体症的概率大大增加,甚至最终导致死亡⋯。而临床上胸部肿瘤的根治性放疗剂量都大于,故放刺性肺纤维化已成为限制放疗剂量从而限制放疗疗效的一个重要因素,它已重影响到放疗在恶性肿瘤中的治疗地位。在胸部肿瘤,食管癌、非小细胞肺癌是严重危害国人健康常见的两种恶性肿瘤,%患者需要接受放疗。然而,经常规放疗后这两种肿瘤总的晟媛室存%先右。若提高肿瘤区域物理或生物效应剂量将有助于提高肿瘤局控和生存率“。5ǚ派浼亮康奶岣咭步嘤υ黾臃畏派湫韵宋姆⑸屎统潭取【到此若能阻断肺的放射性纤维化过程,将提高肺的放射耐受件,从而提高胸部恶因此,阻断放射性肺纤维化过程的研究有着极其重要的临床意义和广泛的应用前景,此将有助于提高患者生存质量和部分肿瘤的局摔率和生存疗效。放射性肺纤维化是电离辐射引起的后期肺损伤的表现形式,是一个不可逆的进展性病变过程,是组织损伤修复信号不断释放的过程,是纤维母细胞长期