[硕士论文]HBV重组杆状病毒HepG2系统的建立及初步应用.pdf

上海第二医科大学
硕士学位论文
HBV重组杆状病毒HepG2系统的建立及初步应用
姓名:于德敏
申请学位级别:硕士
专业:感染病学
指导教师:张欣欣
20050501
学位论文作者签名:作者签名:沌圹尤掌冢汗纾导师签名:ァ灰野佟日期:荒学位论文独创性声明学位论文使用授权声明日期::本人所呈交的学位论文是我在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中作了明确说明并表示谢意。本人完全了解上海第二医科大学有关保留、使用学位论文的规定,学校有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅。有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。
刈楦俗床《綡术系统的建立及初步应用中文摘要持续性腥居敫斡不⒏伟┟芮邢喙亍S捎谘细竦牟《舅拗飨拗疲琀的研究缺乏理想的动物模型,体外细胞培养系统成为研究镅匦院涂共毒新药筛选的重要工具。本研究旨在采用畉瓸重组杆状病毒表达系统将复制型蜃樽入赴中国株及其有关变异株的重组杆状病毒赴系统,并应用该系统初步评价抗病毒药物拉米夫定对泶锛案粗频挠跋臁材料和方法:将倍蜃血清汀⒒駽型又粮俗床毒的转移载体希缓笞;隓菌株中,在细菌内的质粒辅助作用下与杆状病毒基因组发生位点特异性转座,形成含有基因组的重组,转染赴螅安鶫重组杆状病毒采用连续敕椒ń卸ǖ阃槐洌菇╕湟熘曛柿#凑丈鲜龇异株重组杆状病毒M保1阌诠鄄熳H效率及病毒滴度测定,将蜃橹刈槿氪新躺ü獾鞍虻转移载体,从而构建得到可在昆虫细胞中表达绿色荧光蛋白将带有报告基因的重组杆状病毒转导赴韫鄄觳《径杂赴淖5夹剩唤獺重组杆状病毒转导赴ü舛ㄏ胞生长曲线及利用流式细胞仪观察杆状病毒对于赴ぷ刺挠跋欤以不同浓度的丁酸钠处理转导后的赴鄄於∷崮贫杂谀康幕虮泶的增强作用及赴杂诙∷崮频哪褪苄裕航ü菇ǔ晒Φ腍重组杆状病毒转导赴悦噶C庖呶绞匝及⒃诘缇迪鹿鄄熳5疾牟《玖以岸局曛刈楦俗床《竞蚘湟熘曛刈楦俗床《咀5糎细目的:《緑椒ú舛癏的表达及子。
结论:应用检测拉米夫定对于岸局旰捅湟熘昕乖泶锏挠跋臁结果:三种刈楦俗床《揪菇ǔ晒Γü庖呖瞻叨亢蚑随感染复数纳叨黾印8俗床《驹谝欢∕范围内对赴可检测到细胞上清中癏的表达,电镜下可见到转导细胞内产生的嗖《究帕!@追蚨ǹ梢砸种艸野毒株抗原的表达,但对变异株没有显著的抑制作用。杆状病毒表达系统可有效快速地构建各种刈杆状病毒,导入赴螅⒌奶逋釮增殖系统进一步优化以后可用于岸局旰吞匾煨员湟熘晟镅匦缘难芯恳约翱共《疽┪锷秆。A床耐药监测及合理用药提供依据。【关键词】乙型肝炎病毒杆状病毒昆虫细胞5胞,同时以终浓度为痬睦追蚨ǚ直鸾幸种剖匝椋ü鼸方法定量方法测定病毒滴度在之间。重组杆状病毒对于淖5夹的生长状况无明显影响。丁酸钠浓度在痬笨稍銮磕康幕虻谋泶锴叶赴廾飨缘亩拘宰饔谩重组杆状病毒转导赴螅珽
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物学特性的了解相当多是来源于其它嗜肝病毒如土拨鼠乙肝病毒和鸭乙肝病毒等,但是在动物和人的乙肝病毒之间还存在着较大的差异,如鸭乙芯糠椒ā闟玫绱┛准际酰獺癌细胞系校⒈泶锪薍的全部病毒标志4哟耍琀的体外组织培养有了真正的突破。此后,一些学者通过将病毒H救烁蜗赴吧秆∥榷ㄕ螲基因组的新细胞株,建立了表达募钢治榷ū泶锵赴礫】,,这些为慕峁褂牍δ堋⒒虮泶镉氲骺匾约疤逋饪笻药物的筛选等研究工作提供了一个有利工具,大大促进了难芯俊然而这些细胞系仍存在一些不能令人满意之处:首先,一些达细胞系的建立,应用了包含异源启动子的构建物,这些启动子对动子的作用下的表达不同;其次,用于芯康南赴蛋系亩肽孀B疾《静煌笳叩牟《