人胰高血糖素(GC)ELISA试剂盒说明书.doc

人胰高血糖素(GC)酶联免疫分析试剂盒使用说明书厦门慧嘉生物科技有限公司本试剂盒仅供研究使用检测范围:20pg/ml-400pg/ml特异性:本试剂盒可同时检测天然或重组的人GC,且与其他相关物质无交叉反应。有效期:6个月预期应用:ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中GC含量。:-20℃(较长时间不用时);2-8℃(频繁使用时)。,稀释时可在水浴中加温助溶。、英文说明书可能会有不一致之处,请以英文说明书为准。,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。实验原理用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗体的微孔中依次加入标本或标准品、HRP标记的另一株单抗,经过彻底洗涤后用底物显色。颜色的深浅和样品中的GC呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制酶联板(Assayplate):一块(96孔)。标准品(Standard):4瓶(冻干品)。标准品S1S2S3S4浓度(pg/ml)2080180400酶结合物(HRP-conjugate):1×6ml/瓶。底物溶液A(SubstrateA):1×7ml/瓶。底物溶液B(SubstrateB):1×7ml/瓶。浓洗涤液(WashBuffer):1×15ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释20倍。终止液(StopSolution):1×7ml/瓶(2NH2SO4)。需要而未提供的试剂和器材标准规格酶标仪高速离心机电热恒温培养箱干净的试管和Eppendof管系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,最好用多通道移液器6. 蒸馏水,容量瓶等标本的采集及保存血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2-8°C1000g离心15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。细胞培养物上清或其它生物标本:1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。标本的稀释原则:首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量,确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内,检测的结果才是准确的。稀释的过程中,应做好详细的记录。最后计算浓度时,稀释了“N”倍,标本的浓度应再乘以“N”。标准品的稀释原则:4瓶,,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解。操作步骤实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时,先进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔不加任何溶液,余孔分别加标准品或待测样品50μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。每孔加酶结合物50μl(空白孔除外),充分混匀,37℃,120分钟。温育后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,200μl/每孔,甩干。依序每孔加底物溶液A