[优秀论文]早期监测人巨细胞病毒激活感染方法的建立与应用.pdf

上海第二医科大学
硕士学位论文
早期监测人巨细胞病毒激活感染方法的建立与应用
姓名:李敏
申请学位级别:硕士
专业:临床实验与诊断学
指导教师:季育华

,经配对煅榉治鑫尴灾钜,即任何一种都可选用√应用~早期监测人巨细胞病毒激活感染方法的建立与应用中文摘要疾病诊断的现状,非常有必要引进并结合国情展开相关的探索。少的单抗为⋯,。伸口绝大多数人在初次感染时表现为无症状或轻微症状,但一旦受染该病毒则终生相伴,因为病毒以基因或基因产物的方式存在,亦称之谓潜伏感染。多种因素诱发使其激活后,则临床表现为明显症状,其后果是非常严重的。为此,目前临床面临最大的困惑是如何快速、准确地诊断宿主是否处于激活感染状大量的研究资料表明,抗原血症与活动性感染密切相关;随着抗病毒药物的给予,临床症状改善并伴随着病毒抗原血症的消失。同时,定量奈适溃G狈腥居爰せ钭刺涞那鹛峁┯行Чぞ摺>湍壳坝泄抗原血症检测中一个主要的靶抗原是低基质磷酸化蛋白,即的单克隆抗体,通过免疫荧光或酶染技术检测患者外周血多形核细胞蠬抗原的存在,根据检出的阳染细胞数判断激活程度。为此,本研究旨在通过实细胞片作为对照,来建立并优化抗原血症的检测方法庖咦榛。包括单克隆抗体、固定方法、免疫染色方法的选择,各种试剂的有效工作浓度以及操作过程的稳定性等。。或Уタ苟圆煌《炯亮抗セ飨赴榔募斐雎史⑾郑痬的攻击经小时培养的细胞爬片就能检出阳染细胞。间接荧光染色法平霞浣用溉痉略为敏感,但统计学上无明显差异。况且,玫タ沽拷螴省:.觳馐逼通光镜即可,玻片亦可保存。不足的是某些标本中会呈现非特异染色,主要来抗原。用针对我们选择的抗态
应用对监测活动性感染、临床治疗效果及预后更加客观、准确。尸’感染情况进行监测与比较‘结果发现抗原血症与血浆中自内源性过氧化氢酶的干扰,所以标本的前处理很重要。利用分子携带沉降原理,从外周血中加入一定量ズǚ掷隤,纯度高,回收率大,需血量少,有利于临床检测工作的展开。赴墓潭ǎ%的中性多聚甲ⅲ醛,操作时不需要打孔,置℃保存半年之久抗原性稳定。/∥/在实验室建立稳定可行的抗原血症检测方法的基础上,,但无论是有无免疫能力,有症状者奖词浆平均值与抗原阳染细胞数平均值均大于无症状者。方法对监测低水平复制更为敏感,但病的预测值以及对抗药的敏感性均高于觳狻A街址椒ǖ牧:关键词:人巨细胞病毒;;荧光定量聚合酶链反应抗原血症检测对,
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扭”等还将抗原血症检测方法的建立与优化材料和方法第一部分实验室引言致严重的临床表现,甚至是致命性的拍““““③凇6訦幕疃愿腥窘属疱疹病毒科,强频南咝运碊病毒,有包膜。在整个世界范围内感染率都比较高,发达国家感染率痮~%第三世界国家感染率高达%~ィ何夜巳褐蠬腥韭仕溆械厍钜欤骄高达%~%~。初次感染绝大多数为无临床表现的潜伏感染,但一旦感染成立,即可终生伴随,病毒与宿主之间处于平衡状态。当宿主机体内环境受到某种因素影响,例如移植病人、腥菊摺⒅琢龌颊叩让庖力降低时,以及孕妇、新生儿等。平衡状态一旦被打破,潜伏病毒被激活,导行快速、可靠、早期的检测不仅有助于临床的诊断,而且更有助于抗病毒治疗的动态监测。目前临床面临最大的困惑是如何确诊宿主的潜伏病毒己处于激活紫缺ǜ嫘脑嘁浦彩苷咧蠬疃愿腥菊咂渫庵苎6嘈魏细胞谐氏諬抗原,以后许多学者相继报道。抗原血症检测视为活动与否的“晴雨表”。抗原血症检测是用相应单抗,通过免疫组化技术来检测蠬抗原阳染细胞,根据阳染细胞数判定病毒激活程度。由于国内尚无国产单抗,进口试剂盒价格昂贵,所以目前临床很少开展此项工作。本研究想通过实验室内感染的人胚肺细胞爬片作为阳性对照,选择不同进口试剂在本实验室建立并优化抗原血症的检测方法,以至规范为临床实验室开展此项工作提供依据。一、材料匝橛孟赴岸局细胞人巨细胞病毒敏感细胞株人胚肺成纤维细胞由本实验室自己建株,传代至第笫褂茫蝗送庵苎6嘈魏讼赴状态盷
细胞片固定用试剂细胞甩片用玻片需经%的多聚赖氨酸公标准毒株缮虾J写静∽茉航奥捉淌诨菰约细胞培养用试剂胎牛血清、购于美国公司,胰蛋白酶购于美国荆琀、谷氨酰胺购于华美公司,甲基纤维索购于日本东京化成工业,青霉素购于上海先锋药业公司,庆大霉素购于上海第一生化药业公司。分离檬约练肿恿糠直鹞和的糊精购于美国荆梦蘧硌嗡渲瞥%溶液,含ヌヅQG宓