胶乳凝集试验.ppt

实验2: 免疫沉淀技术
华西医院实验医学科临床免疫实验室
安云飞

背景
抗原-抗体反应
沉淀反应
凝集反应
直接凝集反应
间接凝集反应
间接血凝试验
胶乳凝集试验
明胶凝集试验
液体内沉淀试验
凝胶内沉淀试验
单向扩散试验
双向扩散试验
絮状沉淀试验
免疫浊度测定
免疫扩散技术——IgG测定
抗原——可溶性抗原
抗体——相应抗体
介质——凝胶
现象——肉眼可见的沉淀环
作用——定量
methods from clinical chemistry\standard
单向免疫扩散试验(single immunodiffusion test)
实验原理
单向免疫扩散试验
将一定量抗体混匀于琼脂糖凝胶内。制板,打孔,在凝胶孔中加入标准抗原溶液或待测样本。
可溶性抗原在凝胶中向四周呈辐射状扩散并与凝胶中的抗体发生特异性结合,在抗原抗体比例合适处形成白色沉淀环。
沉淀环的大小与抗原的浓度成正相关。以不同浓度标准抗原液制做标准曲线,通过待测标本沉淀环大小(直径)可在标准曲线上查出其抗原浓度。
试剂与器材
羊抗人IgG抗体(单扩效价1:10)
待测血清
琼脂糖
生理盐水
温度计、玻璃板、打孔器、加样器、刻度尺等
操作流程
4
扩散
5
结果判读
1
琼脂糖凝胶准备
2
倒板、打孔
3
加样
1 琼脂凝胶准备
%(12g/L)的琼脂糖凝胶,置于水浴中煮沸溶化至澄清。
(已完成)
2 倒板
将U型片置于两块玻璃板之间并以铁夹固定,直立于水平台面待用。
取9mL已溶化的琼脂糖凝胶于试管中
待琼脂糖温度降至56℃时,加入羊抗人IgG诊断血清1mL,在两支试管间颠倒混匀后迅速倒入事先固定好的玻璃板的间隙中。
待凝胶板完全冷却后,先取下铁夹再小心取下上面的玻璃板和U型片。(已完成)