谷胱甘肽转硫酶P1基因型对溃疡性结肠炎易感性的影响.doc

谷胱甘肽转硫酶P1基因型对溃疡性结肠炎易感性的影响.doc谷胱甘肽转硫酶P1基因型对溃疡性结肠炎易感性的影响
【关键词】谷胱甘肽转硫酶基因型溃疡性结肠炎易感性
Abstract: Objective: To investigate the effect of glutathione S-transferase P1 genotype on the susceptibility to ulcerative colitis(UC) in Chinese. Methods:Polymerase chain reaction(PCR) matory bol,EDTA抗凝,蛋白酶K消化,酚/氯仿法抽提DNA。紫外分光光度计定量,4 ℃保存备用。
GSTP1基因型检测:采用PCR技术扩增GSTP1目的基因。引物由上海生物工程有限公司合成,序列如下:上游5'GTAGTTTGCACAAGGTCAAG3';下游5'TGAGGGGTAAG3'。PCR反应总体系25μl 中含10×PCR缓冲液5μl,MgCl2( mmol/L),dNTPs(200μmol/L),引物(100 pmol/L)各1μl, U,模板DNA 40 ng,其余部分用灭菌双蒸水补足。反应条件:97 ℃预变性5 min,95 ℃变性45 s,65 ℃退火45 s,72 ℃延伸60 s,共35个循环,最后72 ℃再延伸7 min。
PCR反应产物用BsmAⅠ限制性内切酶消化,酶切产物用8%‰硝酸银染色检测。
GSTP1基因型判断:若酶切产物含329 bp、113 bp两个片段,则为ILe/ILe基因型(野生型);若酶切产物含329 bp、216 bp、113 bp三个片段,则为ILe/VaL基因型(杂合突变型);若酶切产物含216 bp、113 bp两片段,则为VaL/VaL基因型(纯合子突变型)。
统计学处理方法采用x2检验。
目前认为,UC的发病涉及环境、遗传、免疫、黏膜屏障功能等因素,这些因素综合作用于遗传易感者,导致肠黏膜免疫反应异常,造成肠黏膜损伤,其中尤以遗传免疫因素在UC发病机制中的作用较为肯定。
GSTP1作为GSTs家族的重要成员之一,其303位点碱基发生A→G突变后,导致GSTP1基因105密码子异亮氨酸被缬氨酸取代,从而影响GSTP1酶与其作用底物的结合力,使该酶对底物的催化活性降低[4],导致毒物从体内清除速度减慢。GSTP1酶不仅在体内发挥解毒、抗氧化等作用,还通过调节细胞激酶活性而影响细胞的增殖[5]。GSTP1酶的活性与其基因型密切相关,在其三种基因型中,纯合子野生型(ILe/ILe) 携带者体内GSTP1酶的活性最高,杂合子突变型(ILe/VaL)次之,而纯合子突变型(VaL/VaL)携带者体内GSTP1酶活性最低,因此该基因型携带者对毒性物质清除能力也最低,对多种疾病的易感性增加。国外研究显示,GSTP1基因在白种人群中的突变率约为50%(包括纯合子突变型和杂合子突变型)[6]。本研究发现,%(71/120),略高于国外人群。有关GSTP1基因与疾病相关性的研究显示,GSTP1突变基因型与隐源性肝硬化[7]、急性白血病[8]、子宫颈癌[9]、卵巢癌