实验四：血液样品的处理及组织样品的制备.ppt

实验五:血液生化样品处理
及组织样品的制备
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目的要求
了解血液生化样品制备的原理;掌握血液生化样品制备的方法。
掌握离心机使用方法和注意事项
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一、血液生化样品制备
采血测定用的血液,多由静脉采集。一般在饲喂前空腹采取,因此时血液中化学成分含量比较稳定。采血时所用的针头、注射器、盛血容器要清洁干燥;接血时应让血液沿着容器壁慢慢注入,以防溶血和产生泡沫。
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血清的制备
血清:全血不加抗凝剂自然凝固后析出的淡黄色液体。
血清的制备:由静脉采集的血液,注入清洁干燥的试管或离心管中。将试管放成斜面,让其自然凝固,一般经3h血块自然收缩而析出血清;也可将血样放入37℃恒温箱内,促使血块收缩,能较快的析出血清。为了缩短时间,也可用离心机分离(未凝或凝固后均可离心),分离出的血清,用滴管移人另一试管中供测定用,如不及时使用,应贮于冰箱中。分离出的血清不应溶血。
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全血及血浆的制备
全血:采血前加入抗凝剂,包括了血浆和
血纤蛋白。
血浆:全血离心后除去血纤蛋白的液体。
抗凝剂:凡是能抑制血液凝固反应的化合
物称为抗凝剂。
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常用抗凝剂的使用方法
1、草酸钾(钠)。
其优点是溶解度大,与血液混合后,迅速与血中钙离子结合,形成不溶的草酸钙,使血液不再凝固。
配制方法:通常先配成10%草酸钾或草酸钠溶液,,转动试管,使其铺散在试管壁上,置80℃干燥箱内烘干,管壁呈白色粉末状,加塞备用。每管含草酸钾或草酸钠10mg,可抗凝血液5ml。
应用范围:适用于非蛋白氮、血糖等多种测定项目,但不适用于钾、钠和钙的测定;另外草酸盐能抑制乳酸脱氢酶、酸性磷酸酶和淀粉酶,故使用时给予注意。
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草酸钾一氟化钠混合剂。
血液内某些化学成分(如血糖)离开机体后仍易被酶作用而影响测定结果。如用混合剂可抑制酶的作用(氟化钠有抑制糖酵解作用),因而能防止血糖等化学物质的分解。
配制方法:称取草酸钾6g,氟化钠3g,加蒸馏水至lOOml,分装在试管内,。80℃烘干后加塞备用。,可抗凝血液5ml。
应用范围:最适用于血糖的测定,而不适用于脲酶法的尿素氮测定(因氟化钠能抑制脲酶活性)。
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肝素
是一种较好的抗凝剂,因它对血中有机成分和无机成分的测定均无影响,其主要作用是抑制凝血酶原转变为凝血酶,使纤维蛋白原不能转化为纤维蛋白而凝血。
配制方法:常将肝素配成lmg/ml的水溶液,,再横放蒸干(不宜超过50℃)备用。每管可抗凝血液5~lOml。
市售肝素大多数为钠盐,可按10mg/ml配制成水溶液。,按上法烘干,可使5~lOml血液不凝固。
应用范围:适用于血液有机物的测定;不适用于凝血酶原的测定。
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乙二胺四乙酸二钠盐(简称EDTANa2)
EDTANa2对血液中钙离子有很大的亲和力,能使钙离子络合而使血液不凝固。
配制方法:常配成40mg/mlEDTANa2水溶液,,在80℃干燥箱内烘干备用。每管可抗凝血液5ml。
应用范围:适用于多种生化分析,但不适用于血浆中含氮物质、钙及钠的测定。
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血浆的制备
血浆的制备由静脉采集的血液,放人装有抗凝剂的试管或离心管中,轻轻摇动